老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔前脂肪分离自脂肪组织；脂肪组织主要由大量群集的脂肪细胞构成
，聚集成团的脂肪细胞由薄层疏松结缔组织分隔成小叶；贮存的脂肪，在需要时可迅速分解成甘油和脂肪酸，经血液输送到各组织以供利用
。它们影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能
、纤溶活动及炎症反应，参与多种重要病理生理过程；脂肪组织已由过去单纯作为能量储存的器官而成为一个极其重要的内分泌系统
。脂肪组织在体内含有两种主要的细胞：一种是在胞浆内积聚脂滴的成熟脂肪细胞
；另一种是虽未在胞浆内积聚脂滴但有这种潜能的前脂肪细胞。前脂肪细胞呈梭形，有分裂和增殖的能力；成熟的脂肪细胞呈圆形，已经失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化前体细胞，与肥胖有着非常密切的关系

。前脂肪细胞是一种类成纤维细胞

，在演变的过程中不断吸收脂质，终成为成熟的脂肪细胞。前脂肪细胞对外界机械损伤的抵抗力较强，可望成为软组织缺损的有益填充物。

方法简介：

公司实验室分离的兔前脂肪采用胶原酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔前脂肪经油红O染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2


，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

生化试剂盒

谷酰胺测试盒   Glamine test kit

谷酸测试盒   Glamate test kit

谷酰胺

、谷酸（两种均可测）   Glamine and glamic acid (two can be measured)

豚鼠调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RAES)试剂盒 ，英文名： RAES ELISA Kit

Human secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) ELISA Kit 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)试剂盒

rabbitmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 兔子巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBCDF(HumanBcelldifferetiationfactor)ELISAKit人B细胞分化因子

纤维素分解活力(FIBRINOLYTIC)试剂盒20次

RabbitCollagenaseTypeIIELISAKit兔子胶原酶II(CollagenaseII)试剂盒规格
：96T/48T

CSF3重组人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 标签) Protein

神经束蛋白(NFASC)重组蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

ARF1重组人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

IL12A Protein Human 重组人 IL12A / NKSF1 蛋白

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

神经束蛋白(NFASC)重组蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

IL12A Protein Human 重组人 IL12A / NKSF1 蛋白

CSF3重组人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

ARF1重组人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

兔前脂肪细胞大鼠巨噬细胞性蛋白5(MIP5)试剂盒 ，英文名： MIP5 ELISA Kit

Monkey acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit乙酰受体抗体(AChRab)试剂盒

RatgranzymesA,Gzms-AELISAKit 大鼠颗粒酶A(Gzms-A)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFRA(Humanfibronectioelatedaigen)ELISAKit人纤维连接素相关抗原

细胞肌酸激酶(CK)活性酶动力比色法定量试剂盒25次

RatPhosphorylatedacetyl-CoAcatboxylase,pACCaseELISAKit大鼠0酸化乙酰羧化酶(pACCase)试剂盒规格
：96T/48T