實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔前脂肪分離自脂肪組織 ；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細胞構成 ，聚集成團的脂肪細胞由薄層疏鬆結締組織分隔成小葉 ；貯存的脂肪 ，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸 ，經血液輸送到各組織以供利用 。它們影響胰島素敏感性 、血壓水平 、內皮功能 、纖溶活動及炎症反應 ，參與多種重要病理生理過程 ；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內分泌係統 。脂肪組織在體內含有兩種主要的細胞 ：一種是在胞漿內積聚脂滴的成熟脂肪細胞 ；另一種是雖未在胞漿內積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞 。前脂肪細胞呈梭形 ，有分裂和增殖的能力 ；成熟的脂肪細胞呈圓形 ，已經失去了分裂及增殖的能力 。由於前脂肪細胞是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化前體細胞 ，與肥胖有著非常密切的關係 。前脂肪細胞是一種類成纖維細胞 ，在演變的過程中不斷吸收脂質 ，終成為成熟的脂肪細胞 。前脂肪細胞對外界機械損傷的抵抗力較強 ，可望成為軟組織缺損的有益填充物 。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔前脂肪采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的兔前脂肪經油紅O染色檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

生化試劑盒

穀酰胺測試盒   Glamine test kit

穀酸測試盒   Glamate test kit

穀酰胺 、穀酸（兩種均可測）   Glamine and glamic acid (two can be measured)

豚鼠調節激活正常T-細胞表達分泌因子(RAES)試劑盒  ，英文名 ： RAES ELISA Kit

Human secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) ELISA Kit 人分泌性白細胞蛋白酶抑製因子(SLPI)試劑盒

rabbitmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 兔子巨噬細胞性蛋白5(MIP-5)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBCDF(HumanBcelldifferetiationfactor)ELISAKit人B細胞分化因子

纖維素分解活力(FIBRINOLYTIC)試劑盒20次

RabbitCollagenaseTypeIIELISAKit兔子膠原酶II(CollagenaseII)試劑盒規格 ：96T/48T

CSF3重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 標簽) Protein

神經束蛋白(NFASC)重組蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

ARF1重組人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

IL12A Protein Human 重組人 IL12A / NKSF1 蛋白

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

神經束蛋白(NFASC)重組蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

IL12A Protein Human 重組人 IL12A / NKSF1 蛋白

CSF3重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

ARF1重組人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

兔前脂肪細胞大鼠巨噬細胞性蛋白5(MIP5)試劑盒  ，英文名 ： MIP5 ELISA Kit

Monkey acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit乙酰受體抗體(AChRab)試劑盒

RatgranzymesA,Gzms-AELISAKit 大鼠顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFRA(Humanfibronectioelatedaigen)ELISAKit人纖維連接素相關抗原

細胞肌酸激酶(CK)活性酶動力比色法定量試劑盒25次

RatPhosphorylatedacetyl-CoAcatboxylase,pACCaseELISAKit大鼠0酸化乙酰羧化酶(pACCase)試劑盒規格 ：96T/48T