老哥俱乐部

细胞简介：

兔脐动脉内皮分离自脐带组织；它是脐动脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构，脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉
，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中
，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管
，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换
。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘，脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。

方法简介：

实验室分离的兔脐动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔脐动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）
，明胶（0.1%）

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性

：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件：气相

：空气，95%；CO2，5%

兔脐动脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠巨噬细胞性蛋白5(MIP5)检测试剂盒 ，英文名： MIP5 ELISA Kit

Monkey acetylcholine receptor aibody (AChRab) ELISA Kit乙酰受体抗体(AChRab)检测试剂盒

RatgranzymesA,Gzms-AELISAKit 大鼠颗粒酶A(Gzms-A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFRA(Humanfibronectioelatedaigen)ELISAKit人纤维连接素相关抗原

细胞肌酸激酶(CK)活性酶动力比色法定量检测试剂盒25次

RatPhosphorylatedacetyl-CoAcatboxylase,pACCaseELISAKit大鼠0酸化乙酰羧化酶(pACCase)检测试剂盒规格
：96T/48T

CSF3重组人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 标签) Protein

神经束蛋白(NFASC)重组蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

ARF1重组人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

IL12A Protein Human 重组人 IL12A / NKSF1 蛋白

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

神经束蛋白(NFASC)重组蛋白 Recombinant Neurofascin (NFASC)

IL12A Protein Human 重组人 IL12A / NKSF1 蛋白

CSF3重组人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Duck/Hong Kong/p46/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

ARF1重组人 ARF1 / ADP-ribosylation factor 1 蛋白 Protein

豚鼠调节激活正常T-细胞表达分泌因子(RAES)检测试剂盒 ，英文名
： RAES ELISA Kit

Human secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) ELISA Kit 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)检测试剂盒

rabbitmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit 兔子巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBCDF(HumanBcelldifferetiationfactor)ELISAKit人B细胞分化因子

纤维素分解活力(FIBRINOLYTIC)检测试剂盒20次

RabbitCollagenaseTypeIIELISAKit兔子胶原酶II(CollagenaseII)检测试剂盒规格：96T/48T

兔脐动脉内皮细胞生化检测试剂盒

谷酰胺测试盒   Glamine test kit

谷酸测试盒   Glamate test kit

谷酰胺
、谷酸（两种均可测）   Glamine and glamic acid (two can be measured)

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。