老哥俱乐部

细胞简介：

兔膀胱成纤维分离自膀胱组织；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物
，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内
，其后端开口与尿道相通
。膀胱与尿道的交界处有括约肌
，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高
，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口

，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的膀胱成纤维细胞呈圆形
、折光性良好
，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大

，细胞质透明，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。膀胱成纤维细胞分泌的生长因子是一种具有多功能的促有丝分裂原
，研究已表明其参与恶性肿瘤的形成过程。近年来
，碱性成纤维细胞生长因子在膀胱癌发病过程中的作用、与生物学行为之间的关系以及治疗上的应用已受到重视。

方法简介：

公司实验室分离的兔膀胱成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔膀胱成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6


、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠雌二醇(E2)检测试剂盒 ，英文名： E2 ELISA Kit

Mouse 5 hydroxyyptamine (5-HT) ELISA Kit 小鼠5羟色胺(5-HT)检测试剂盒

ELISA 小鼠环0酸腺苷(mouse cAMP)  进口分装

CLIAKitforLF/LTFELISAKit大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白

通用型HRP-AEC底物显色试剂盒10次

ELISAKitMIP-1α/CCL3巨噬细胞性蛋白1α

CLEC5A重组大鼠 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 蛋白 Protein

CYP3A4(Cytochrome p450 3A4 0.5mgCYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 细胞色素P450 3A4抗原

SNAP25重组人 SNAP25 / SUP 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Human 重组人 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 标签)

CPA1 Protein Mouse 重组小鼠 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

CYP3A4(Cytochrome p450 3A4 0.5mgCYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 细胞色素P450 3A4抗原

IFNAR1 Protein Human 重组人 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 标签)

CLEC5A重组大鼠 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 蛋白 Protein

CPA1 Protein Mouse 重组小鼠 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

SNAP25重组人 SNAP25 / SUP 蛋白 Protein

小鼠16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat thrombin activatable fibrinolysis inhibitor / thrombin activatable fibrinolysis inhibitor (TAFI)ELISA Kit 大鼠纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)检测试剂盒

HumanDopamineD1receptor,D1RELISAKit 人多巴胺D1受体(D1R)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCoxsackievirusIgG,CoxV-IgG检测试剂盒人柯萨奇病毒IgG(CoxV-IgG)检测试剂盒规格：96T/48T

组织C-MET激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProteindisulfide-isomeraseprecursor,PDIELISAKit人蛋白二硫化物异构酶前体(PDI)检测试剂盒规格

：96T/48T

兔膀胱成纤维细胞铁蛋白   英文名称：   human Ferritin   规格
：      英文缩写：   Fe

成纤维细胞生长因子23   英文名称
：   Human Fibroblast Growth Factor 23   规格：      英文缩写：   FGF-23

成纤维细胞生长因子2   英文名称：   Human Fibroblast Growth Factor 2   规格：      英文缩写：   FGF-2

人V抗原   英文名称
：   Human Vcoagulation factor 5 Aigen   规格：      英文缩写
：   F5-Ag

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。