細胞簡介 ：

兔腦成纖維分離自腦組織 ；大腦分左右兩個半球 ，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分 ，它是神經元胞體集中的地方 。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質 。每一個半球都有三個麵 ，即外側麵（約占整個皮質麵積的1/3） 、內側麵和底麵（占2/3的麵積） ；半球表麵有很多深淺不等的溝或裂 ，溝或裂之間的隆起叫回 ，它們大大增加了大腦的表麵積 ；大腦外側麵重要的溝 、裂有大腦外側裂 、頂枕裂和中央溝 。由於三溝裂之界隔 ，使大腦皮質組分為額葉 、頂葉 、顳葉 、枕葉四大部分 。成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 ；成纖維細胞較大 ，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。剛分離的腦成纖維細胞呈圓形 、折光性良好 ，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁 ，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形 ，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速 ，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形 ，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腦成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腦成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腦成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠骨膜蛋白(POSTN)檢測試劑盒  ，英文名 ： POSTN ELISA Kit

Human type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒

RatActivinAELISAKit 大鼠活化素A(Activin-A)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforEM-2(Humanendomorphin-2)ELISAKit人內肽-2

細胞內核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)流式細胞分析試劑盒10次

RatIerleukin5,IL-5ELISAKit大鼠白介素5(IL-5)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

HRG重組人 HPRG / HRG 蛋白 Protein

血管生長素(ANG)重組蛋白 Recombinant Angiogenin (ANG)

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL7R Protein Human 重組人 IL7RA / CD127 蛋白

GAG-P24 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group O, strain BCF06)

血管生長素(ANG)重組蛋白 Recombinant Angiogenin (ANG)

IL7R Protein Human 重組人 IL7RA / CD127 蛋白

HRG重組人 HPRG / HRG 蛋白 Protein

GAG-P24 Protein HIV 重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group O, strain BCF06)

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

豚鼠表皮生長因子(EGF)檢測試劑盒  ，英文名 ： EGF ELISA Kit

One tea phenol amine (CA) ELISA Kit 人兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒

Rabbitthrombieceptor,ELISAKit 兔子受體()檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBetaGAL(MouseBeta-galactosidase)ELISAKit小鼠β半乳糖苷酶

細菌鹽還原酶定性檢測試劑盒20次

RabbitHeatShockProtein90,HSP-90ELISAKit兔熱休克蛋白90(HSP-90)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腦成纖維細胞人脂肪分化相關蛋白(ADRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脂多糖結合蛋白(LBP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脂多糖/內毒素(LPS)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人脂蛋白脂酶(LPL)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。