老哥俱乐部

细胞简介：

兔脑成纤维分离自脑组织；大脑分左右两个半球
，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方
。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）
、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积
；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂
、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔
，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显

。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的脑成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足

，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形

，胞核清晰
，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合

，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介

：

实验室分离的兔脑成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔脑成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相

：空气，95%；CO2，5%

兔脑成纤维体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠骨膜蛋白(POSTN)检测试剂盒
，英文名
： POSTN ELISA Kit

Human type III procollagen (P III NP) ELISA Kit 人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒

RatActivinAELISAKit 大鼠活化素A(Activin-A)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforEM-2(Humanendomorphin-2)ELISAKit人内肽-2

细胞内核酸氧化8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)流式细胞分析试剂盒10次

RatIerleukin5,IL-5ELISAKit大鼠白介素5(IL-5)检测试剂盒规格：96T/48T

HRG重组人 HPRG / HRG 蛋白 Protein

血管生长素(ANG)重组蛋白 Recombinant Angiogenin (ANG)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL7R Protein Human 重组人 IL7RA / CD127 蛋白

GAG-P24 Protein HIV 重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group O, strain BCF06)

血管生长素(ANG)重组蛋白 Recombinant Angiogenin (ANG)

IL7R Protein Human 重组人 IL7RA / CD127 蛋白

HRG重组人 HPRG / HRG 蛋白 Protein

GAG-P24 Protein HIV 重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group O, strain BCF06)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

豚鼠表皮生长因子(EGF)检测试剂盒
，英文名： EGF ELISA Kit

One tea phenol amine (CA) ELISA Kit 人儿茶酚胺(CA)检测试剂盒

Rabbitthrombieceptor,ELISAKit 兔子受体()检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBetaGAL(MouseBeta-galactosidase)ELISAKit小鼠β半乳糖苷酶

细菌盐还原酶定性检测试剂盒20次

RabbitHeatShockProtein90,HSP-90ELISAKit兔热休克蛋白90(HSP-90)检测试剂盒规格：96T/48T

兔脑成纤维细胞人脂肪分化相关蛋白(ADRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人脂多糖/内毒素(LPS)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人脂蛋白脂酶(LPL)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min


，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。