老哥俱乐部

细胞简介
：

兔卵泡颗粒细胞（卵巢颗粒细胞）分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官
，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡
，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能
。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织
。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分
，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央
，由疏松结缔组织构成

，其中有许多血管
、淋巴管和神经
。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞
，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵
、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。卵巢颗粒细胞是卵泡内的大细胞群
，也是主要的功能细胞

，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖

，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起，尤其在卵泡发育后期，此外，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成
，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境。细胞形状呈圆形或椭圆形。

方法简介
：

实验室分离的兔卵泡颗粒采用先机械分离

，而后胶原酶消化，后差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔卵泡颗粒经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性
：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔卵泡颗粒体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置


，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)检测试剂盒 ，英文名： M2-PK ELISA Kit

Mouse alpha L fucosidase (AFU) ELISA Kit 小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)检测试剂盒

ELISA 小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78)  进口分装

CLIAKitforKLK11(HumanKallikrein11)ELISAKit人11

通用型肠杆菌(EerobacteriaceaSTX2)试剂盒20次

ELISAKitHIS大鼠组胺

IL13RA2重组小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8 0.5mgCDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依赖性激酶8抗原

SLITRK4重组人 SLITRK4 / Slitrk4 蛋白 Protein

HSPA1A Protein Human 重组人 HSP70 / HSPA1A 蛋白

TNFSF9 Protein Mouse 重组小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8 0.5mgCDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依赖性激酶8抗原

HSPA1A Protein Human 重组人 HSP70 / HSPA1A 蛋白

IL13RA2重组小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

TNFSF9 Protein Mouse 重组小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白

SLITRK4重组人 SLITRK4 / Slitrk4 蛋白 Protein

小鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat vitamin K1 (VK1) ELISA Kit 大鼠K1(VK1)检测试剂盒

Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 人乙酰受体抗体(AChRab)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humancommonacelymphocyticleukaemiaaigen,CALLA检测试剂盒人普通急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织AURORA-C激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPyridinolinecrosslinks,PYDELISAKit人胶原交联(PYD)检测试剂盒规格：96T/48T

兔卵泡颗粒细胞兔骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔骨保护素(OPG)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

兔胰淀素(Amylin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。