實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔卵巢上皮分離自卵巢組織 ；卵巢是雌性動物的生殖器官 ，卵巢的功能是產生卵以及類固醇激素 。卵巢的位置與睾丸相同 ，僅左側發育（右側已退化） ，呈葡萄狀 ，均為處於不同發育時期的卵泡 ，卵泡呈黃色 ，卵巢表麵密布血管 。卵巢的大小與年齡和產卵期有關 。大多數脊椎動物有兩個卵巢 ，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結構 ，而所有鳥類隻有左側卵巢有機能 。卵巢是位於子宮兩側的一對卵圓形的生殖器官 ，它的外表有一層上皮組織 ，其下方有薄層的結締組織 。卵巢的內部結構可分為皮質和髓質 。皮質位於卵巢的周圍部分 ，主要由卵泡和結締組織構成 ；髓質位於中央 ，由疏鬆結締組織構成 ，其中有許多血管 、淋巴管和神經 。卵巢上皮細胞主要功能 ：①上皮細胞能分泌激素 ，刺激卵細胞分化成熟；②細胞能分泌炎症介質 ，參與炎症反應 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔卵巢上皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔卵巢上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：上皮細胞樣

傳代特性 ：可傳1-2代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔卵巢上皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品 ：

大鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒  ，英文名 ： FSH ELISA Kit

Mouse 17 hydroxyprogesterone (17-OHP) ELISA Kit 小鼠17羥孕酮(17-OHP)檢測試劑盒

ELISA 小鼠N端前腦素(mouse -proBNP)  進口分裝

CLIAKitforLHRH(MouseLeinizingHormone-ReleasingHormone)ELISAKit小鼠黃體生成素釋放激素

通用型HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定性檢測試劑盒20次

ELISAKitSJA槐凝集素

CA12重組人 Carbonic Anhydrase XII / CA12 蛋白 Protein

顆粒酶K(GZMK)重組蛋白 Recombinant Granzyme K (GZMK)

MRPL44重組人 MRPL44 蛋白 Protein

IFNAR2 Protein Human 重組人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白

HA Protein H2N2 重組甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

顆粒酶K(GZMK)重組蛋白 Recombinant Granzyme K (GZMK)

IFNAR2 Protein Human 重組人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白

CA12重組人 Carbonic Anhydrase XII / CA12 蛋白 Protein

HA Protein H2N2 重組甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

MRPL44重組人 MRPL44 蛋白 Protein

小鼠11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)檢測試劑盒 96T/48T

Human gasin cell aibody (GCA) ELISA Kit 人胃泌素細胞抗體(GCA)檢測試劑盒

PorcinePrednisoloneELISAKit 豬龍(Prednisolone)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCpGoligodeoxynucleotide,CpG-ODN檢測試劑盒人未甲基化寡聚脫氧核苷酸(CpG-ODN)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織COT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinCarbonyl ，PCELISAKit人羰基化蛋白(PC)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔卵巢上皮細胞甜菜堿含量測定試劑盒   可見分光光度法   50管/48樣

二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）試劑盒   紫外分光光度法   50管/48樣

二0酸核糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）試劑盒   紫外分光光度法   25管/24樣

漆酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣