細胞簡介 ：

兔角膜基質分離自眼角膜組織 ；角膜位於眼球前壁的一層透明膜 ，約占纖維膜的前1/6 ，從後麵看角膜呈正圓形 ，從前麵看為橫橢圓形 。角膜厚度各部分不盡相同 ，中央部薄 。角膜有十分敏感的神經末梢 ，如有外物接觸角膜 ，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛 。為了保持透明 ，角膜並沒有血管 ，透過外界空氣 、淚液及房水獲取養份及氧氣 。角膜分為五層 ，由前向後依次為 ：上皮細胞層 、前彈力層 、基質層 、後彈力層 、內皮細胞層 。角膜基質層是角膜的主要組成部分 ，占據角膜厚度的90% ，由角膜基質細胞 、膠原纖維和細胞外基質構成 。角膜基質層缺損的修複主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成 。角膜基質層具有結構規整 ，透明度高的特點 ，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分 ，維持角膜的透明度 ，此細胞對於角膜損傷的修複具有重要意義 。角膜基質細胞 ，存在於角膜基質層中，在正常情況下 ，處於靜止狀態 。但當角膜損傷時 ，不同上皮來源的因子及環境信號 ，將影響角膜基質細胞的應答反應 ，決定著角膜能否被修複 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的兔角膜基質采用混合膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的兔角膜基質經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

線粒體促凋亡蛋白 (SMAC)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

肺表麵活性物質相關蛋白 A(SP-A)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

和活化調節趨化因子 (TARC)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

表達化學因子 (TECK)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA 試劑盒

Human serine / threonine protein phosphatase (STK) ELISA Kit 人絲/蘇蛋酸酶(STK)試劑盒

HumanHemolyticcompleme,HcELISAKit 人溶血補體(Hc)試劑盒 進口分裝

Humanapoptosisinducingfactor,AIF試劑盒人凋亡誘導因子(AIF)試劑盒

植物葉片高質化葉綠體分離試劑盒10次

HumaissuePolypeptideAigen ，TPAELISAKit人組織多肽抗原(TPA)試劑盒

FCGR1重組小鼠 CD64 / FCGR1 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

AD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經絲蛋白蛋白多肽抗原(人 0.5mgAD7C-NTP/NTP/AF peptide 神經絲蛋白蛋白多肽抗原(人)

MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白  Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽)

REG4 Protein Rat 重組大鼠 REG4 蛋白 (His 標簽)

促生長激素釋放激素(GHRH)重組蛋白 Recombinant Growth Hormone Releasing Hormone (GHRH)

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 標簽)

CSNK2A1重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (His 標簽)

LIF重組人 LIF 蛋白  Protein

兔角膜基質細胞大鼠粒細胞集落刺激因子(GCSF)試劑盒  ，英文名 ： GCSF ELISA Kit

Mouse free testosterone (F-TESTO) ELISA Kit 小鼠遊離(F-TESTO)試劑盒

Ratendotoxin,ETELISAKit 大鼠內毒素(ET)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforGAD-Ab(Mouseglamicaciddecarboxylaseaoaibody)ELISAKit小鼠穀脫羧酶自身抗體

細胞過氧化酶活性染色試劑盒50次

ratProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit大鼠前列腺素E1(PGE1)試劑盒

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。