老哥俱乐部

细胞简介
：

兔呼吸道上皮分离自呼吸道；呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道
，有肺脊椎动物的呼吸道分上
、下两部
：鼻

、咽和喉合称上呼吸道
。气管及其以后一分再分的管道，合称为下呼吸道，或称为气管树。气管树是随着动物的进化逐渐复杂化的。整个呼吸道内表面都分布有分泌液和纤毛（鼻孔
、咽后壁和声带黏膜除外），它能温暖（或冷却）、湿润和净化吸入的空气，对于呼吸器官和机体有着保护作用

。呼吸道以骨或软骨做支架，其内表面覆盖着黏膜
，黏膜内分布着丰富的毛细血管。呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面

，主要由柱状，杯形，梭形和锥形等不同形状细胞组成
。看上去像复层上皮，但实际上所有细胞底部均附于基膜上，属单层上皮，故称假复层柱状上皮，上皮表面有纤毛，杯状细胞可分泌粘液
，包裹着大量细菌
，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道。

方法简介

：

实验室分离的兔呼吸道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔呼吸道上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV

、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基
：含FBS、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液

：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔呼吸道上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠甲状旁腺素受体2(PTHR2)检测试剂盒 ，英文名： PTHR2 ELISA Kit

Mouse tumor necrosis factor soluble receptor I (TNFsR- I) ELISA Kit 小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)检测试剂盒

Ratcarbonicanhydrase2,CA-2ELISAKit 大鼠酶2(CA-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFEP(HumanFreeerythrocyteproloporphyrin)ELISAKit人游离原卟啉

细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性荧光定量检测试剂盒20次

Ratnuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)检测试剂盒规格：96T/48T

HAVCR2重组食蟹猴 TIM3 / HAVCR2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II 0.5mgIGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰岛素样生长因子-II(抗原)

MMP8重组人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

CMPK1 Protein Human 重组人 CMPK1 蛋白

PRL Protein Mouse 重组小鼠 PRL / Prolactin 蛋白

IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II 0.5mgIGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰岛素样生长因子-II(抗原)

CMPK1 Protein Human 重组人 CMPK1 蛋白

HAVCR2重组食蟹猴 TIM3 / HAVCR2 蛋白 (Fc 标签) Protein

PRL Protein Mouse 重组小鼠 PRL / Prolactin 蛋白

MMP8重组人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

小鼠结合蛋白(RBP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit A(IgA)检测试剂盒

HumanAquaporin2,AQP-2ELISAKit 人水通道蛋白2(AQP-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Elisa伪狂犬病毒gE2.0抗体诊断试剂盒5*96孔5*96孔

真菌/酵母a-(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶联比色法定量检测试剂盒20次

MouseC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-ⅠELISAKit小鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)检测试剂盒规格：96T/48T

兔呼吸道上皮细胞小鼠状腺原酸(T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠补体片断5a(C5a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠补体片断3a(C3a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠17羟孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。