老哥俱乐部

细胞简介
：

兔冠状动脉平滑肌分离自冠状动脉组织；冠状动脉是供给心脏血液的动脉
，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型、均衡型
、左优势型。左右冠状动脉是升主动脉的对分支
。左冠状动脉为一短干，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后，立即分为前室间支和旋支

。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分，细胞膜上分布着多种离子通道，如电压依赖性Na+通道、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化
、超极化，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖
、炎症及凋亡等。因此，原代分离培养的冠状动脉平滑肌细胞，对研究生理和病理状态下离子通道及血管张力变化机制具有非常重要的作用。冠状动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后
，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形
、居中；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：

实验室分离的兔冠状动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔冠状动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性
：可传5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

兔冠状动脉平滑肌体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠癌胚抗原试剂盒   小鼠癌胚抗原试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠癌胚抗原试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠癌胚抗原试剂盒
、小鼠癌胚抗原试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

超氧化物歧化酶测试剂盒   超氧化物歧化酶测试剂盒   规格型号
：96T/48T   超氧化物歧化酶测试剂盒
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：超氧化物歧化酶测试剂盒、超氧化物歧化酶测试剂盒   保存条件
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红细胞膜蛋白试剂盒   红细胞膜蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   红细胞膜蛋白试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：红细胞膜蛋白试剂盒、红细胞膜蛋白试剂盒   保存条件
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小鼠16α羟基雌试剂盒   小鼠16α羟基雌试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠16α羟基雌试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠16α羟基雌试剂盒
、小鼠16α羟基雌试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
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小鼠坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 人抗心0脂抗体IgM(ACA-IgM)试剂盒

HumanE3/ubiquitin-proteinligase,E3/UBPLELISAKit 人泛素连接酶(E3/UBPL)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA(Humanadrenalcoexaibody)ELISAKit人肾上腺皮质抗体

一步法荧光定量PCR反应液20次

MouseomeinELISAKit小鼠网膜素(omein)试剂盒规格：96T/48T

EDA2R重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 Protein

GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA结合蛋白3抗原

CD300A重组人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白 Protein

ERP27 Protein Human 重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签)

MMP8 Protein Mouse 重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白

GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA结合蛋白3抗原

ERP27 Protein Human 重组人 ERP27 蛋白 (Fc 标签)

EDA2R重组大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 Protein

MMP8 Protein Mouse 重组小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白

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兔冠状动脉平滑肌细胞大鼠卵0脂脂酰转移酶(LCAT)试剂盒 ，英文名
： LCAT ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor binding protein 3 (IGFBP-3) ELISA Kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)试剂盒

Rat50%complemehemolysis,CH50ELISAKit 大鼠血清总补体(CH50)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGDNFELISAKit大鼠胶质细胞系来源的神经营养因子

细胞高密度脂蛋白(HDL-Cholesterol)酶连续循环比色法定量试剂盒20次

RatSerumamyloidA,SAAELISAKit大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)试剂盒规格：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决


。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。