細胞簡介 ：

兔骨內膜間充質幹分離自股骨 、脛骨 ；骨內膜是一層致密結締組織膜 ，覆蓋在骨的表麵（關節麵除外） ，新鮮骨內膜呈粉紅色 ，含有豐富的血管 、神經和成骨細胞 。此外 ，附著於骨的肌腱 、韌帶於附著部位都與骨內膜編織在一起。因而骨內膜與骨質結合甚為牢固 。骨內膜富含血管、神經 ，通過骨質的滋養孔分布於骨質和骨髓 。骨內膜分內 、外兩層 ，外層主要是粗大的膠原纖維束 ，部分纖維穿入骨質 ，使骨內膜固定於骨麵 ；內層疏鬆 ，含成骨細胞和破骨細胞（分別具有產生新骨質和改建骨的功能） 。骨髓腔和骨鬆質的網眼也襯著一層菲薄的結締組織膜 ，叫做骨膜 。骨內膜的內層和骨膜有分化成骨細胞和破骨細胞的能力 ，以形成新骨質和破壞 、改造已生成的骨質 ，所以對骨的發生 、生長 、修複等具有重要意義 。骨內膜間充質幹細胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的幹細胞 ，可以向骨 、軟骨 、肌組織 、皮膚 、脂肪 、神經等多種組織分化 ，因此可以作為組織工程中的種子細胞 。骨內膜間充質幹細胞的體外培養條件要求較高 ，在培養過程中 ，受貼壁時間 、種植密度 、血清含量 、培養溫度和培養基pH值等條件的影響 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的兔骨內膜間充質幹采用衝洗骨髓 、消化骨內膜 、差速貼壁法結合培養基篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的兔骨內膜間充質幹經CD90免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠CD4分子(CD4)檢測試劑盒  ，英文名 ： CD4 ELISA Kit

Mouse ulasensitive thyroid stimulating hormone (U-TSH) ELISA Kit 小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)檢測試劑盒

MouseiactParathormone,i-PTHELISAKit 小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISAKit人高靈敏度促甲狀腺激素

通用型細胞周期同步(SYNCHRONY)細胞流式分析試劑盒20次

ELISAKitADRA1A大鼠能a1A受體

SEMA5A重組小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 蛋白 Protein

防禦素β113(DEFβ113)重組蛋白 Recombinant Defensin Beta 113 (DEFb113)

TSPAN8重組人 TSPAN8 / Tetraspanin 8 / TM4SF3 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CLIC4 Protein Human 重組人 CLIC4 蛋白

FCGRT & B2M Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FCGRT & B2M Heterodimer 蛋白

70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)重組蛋白 Recombinant Heat Shock 70kDa Protein 1 Like Protein (HSPA1L)

CLIC4 Protein Human 重組人 CLIC4 蛋白

EGF重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ACE2 Protein Rat 重組大鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白

MKI67重組人 MKI67 蛋白 (GST 標簽) Protein

小鼠瘦素(LEP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ankyrin (ankyrin) ELISA Kit 人錨蛋白(ankyrin)檢測試劑盒

Humandecay-acceleratingactivity,DAFELISAKit 人衰變加速因子(DAF/CD55)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

E2ELISA魚雌二醇規格 ：96T/48T

增強型HRP-AEC底物顯色試劑盒10次

MouseCyclin-D2ELISAKit小鼠細胞周期素D2(Cyclin-D2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔骨內膜間充質幹細胞小鼠上腺髓質素檢測試劑盒   小鼠上腺髓質素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠上腺髓質素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠上腺髓質素試劑盒 、小鼠上腺髓質素檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠上腺素檢測試劑盒   小鼠上腺素試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠上腺素試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠上腺素試劑盒 、小鼠上腺素檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠上腺素能a1A受體檢測試劑盒   小鼠上腺素能a1A受體試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠上腺素能a1A受體試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠上腺素能a1A受體試劑盒 、小鼠上腺素能a1A受體檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠神經營養因子檢測試劑盒   小鼠神經營養因子試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠神經營養因子試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠神經營養因子試劑盒 、小鼠神經營養因子檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。