細胞簡介 ：

兔睾丸支持分離自睾丸 ；睾丸支持細胞又稱Sertoli細胞 ，在體內呈不規則的高錐體形 ，細胞基部附著在基膜上 ，頂部伸至曲精小管腔麵 。它是生精細胞的支架 ，為其提供必需的營養物質 ，能合成與分泌雄激素結合蛋白 ，為其提供高濃度的雄激素環境等，還具有構成血-睾屏障 ，形成睾丸內微環境 ，調節發生等功能 。睾丸支持細胞是睾丸的主要組成細胞 ，能分泌多種生長因子和免疫抑製因子 ，不僅可為提供營養支持和免疫保護 ，也能對其他細胞 ，如胰島和神經細胞提供營養支持 ，而且當其與胰島或神經細胞共移植時 ，也能夠為這些細胞提供免疫保護 ，提高植活率 。因此 ，睾丸支持細胞在細胞移植中具有廣泛的應用前景 。製備高活率的Sertoli不僅對Sertoli的基礎研究有重要價值 ，而且在發生等領域有重要意義 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔睾丸支持采用膠原酶消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔睾丸支持經Fas-L免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

兔睾丸支持體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠阿立新A(OrexinA)試劑盒   96T/48T

小鼠γ幹擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)試劑盒   96T/48T

小鼠γ幹擾素(IFN-γ)試劑盒   96T/48T

小鼠γ基(GABA)試劑盒   96T/48T

小鼠花生四烯酸(AA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human neuroophin 4 (-4) ELISA Kit 人神經營養因子4(-4)試劑盒

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Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgA試劑盒人抗髓0脂抗體IgA(AMAIgA)試劑盒規格 ：96T/48T

植物染色質甲基化酶(chromomethylase)活性酶連續循環比色法定量試劑盒20次

HumanureaserelatedproteinC,UreCELISAKit人尿素酶相關蛋白C(UreC)試劑盒規格 ：96T/48T

IL17RD重組狗 IL17RD 蛋白 Protein

NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB 0.5mgNF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 細胞核因子50/κ基因結合核因子50抗原

CASP14重組人 Caspase-14 / CASP14 蛋白 Protein

ETHE1 Protein Human 重組人 ETHE1 / HSCO 蛋白

CD3D & CD3E Protein Mouse 重組小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白

NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB 0.5mgNF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 細胞核因子50/κ基因結合核因子50抗原

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兔睾丸支持細胞大鼠密封蛋白(OCLN)試劑盒  ，英文名 ： OCLN ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor 1 (IGF-1) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒

RatLeukoieneC4,LT-C4ELISAKit 大鼠白三烯C4(LTC4)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGelsolin(MouseGelsolin)ELISAKit小鼠凝溶膠蛋白

細胞甘油三脂脂酶法格莫瑞(Gomori)染色試劑盒50次

RatSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISAKit大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)試劑盒規格 ：96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。