實驗報告 ：

一 、分離與培養：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔腹膜毛細血管內皮分離自腹膜組織 ；腹膜是存在於高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜 ，主要由間皮細胞和間質（結締組織 、纖維 、毛細血管、淋巴管）構成 ，藉由結締組織的支持所形成的一層膜狀組織 。腹膜包覆大部分腹腔內的器官 ，能分泌黏液潤濕髒器的表麵 ，減輕髒器間的摩擦 。腹腔髒器的血液 、淋巴和神經組織經由腹膜與外界相連 ；腹膜也具有吸收撞擊保護內髒的效果 。腹膜（peritoneum）為全身麵積大 、配布複雜的漿膜 ，由皮及少量結締組織構成 ，薄而光滑 ，呈半透明狀 。襯於腹 、盆腔壁內表麵的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層 ；覆蓋腹 、盆腔器表麵的部分稱為髒腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜髒層 。髒腹膜與壁腹膜互相延續 、移行 ，共同圍成不規則的潛在性腔隙 ，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity） 。腹膜腔是髒 、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙 。腹膜腔內有少量漿液 ，在髒器活動時可減少摩擦 。腹膜的主要生理功能：①分泌功能 ；②吸收功能 ；③再生能力 ；④防禦功能 ；⑤調理功能 。髒 、壁腹膜都有豐富的毛細血管 ，毛細血管上有不同的孔徑 ；腹膜的毛細血管和毛細血管後靜脈是進行溶質交換的主要場所 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腹膜毛細血管內皮采用膠原酶-聯合消化法結合化學試劑抑製法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腹膜毛細血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：內皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腹膜毛細血管內皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)檢測試劑盒  ，英文名 ： CXCL16 ELISA Kit

Mouse angiogenin (ANG) ELISA Kit 小鼠血管生長素(ANG)檢測試劑盒

RatmammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit 大鼠癌標誌物-CA153檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGSKELISAKit大鼠糖原合成酶激酶

細胞沉默調節蛋白1(SI1)活性比色法定量檢測試劑盒20/50次

RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CDH18重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白 Protein

IL-17(Interleukin-17 0.5mgIL-17(Interleukin-17)human 白介素-17抗原(人)

IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

HNRNPR Protein Human 重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽)

ICOS Protein Mouse 重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽)

IL-17(Interleukin-17 0.5mgIL-17(Interleukin-17)human 白介素-17抗原(人)

HNRNPR Protein Human 重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽)

CDH18重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白 Protein

ICOS Protein Mouse 重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽)

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小鼠FMS樣酪酸激酶3配體(Flt3L)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat P-selectin (omein) ELISA Kit 大鼠網膜素(omein)檢測試劑盒

Humahyroopin-releasinghormone,HELISAKIT 人促甲狀腺素釋放激素(H)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCollagen-likeBioproteinⅡ,HCBⅡ檢測試劑盒人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅡfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅡELISAKitGFc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)檢測試劑盒規格：96T/48T

兔腹膜毛細血管內皮細胞兔結締組織生長因子(rabbit CTGF)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔心肌鈣蛋白I(rabbit cTnI)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔心肌鈣蛋白T(rabbit c)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔胱抑素C(rabbit Cystatin C)   作用：   ELISA   規格 ：      進口分裝