細胞簡介 ：

兔腸成纖維分離自腸道組織 ；腸道指的是從胃幽門至門的消化管 。腸是消化管中長的一段 ，也是功能重要的一段 。哺乳動物的腸包括小腸 、大腸和直腸3大段 。大量的消化作用和幾乎全部消化產物的吸收都是在小腸內進行的 ，大腸主要濃縮食物殘渣 ，形成糞便 ，再通過直腸經門排出體外 。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化 、吸收食物 ，以提供足夠的養分 ，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內大的微生態係統 。各種哺乳動物腸的結構和功能基本相似 。腸壁結構一般分4層 ，由外向內依次為 ：漿膜層（腹腔髒層） ，平滑肌層 ，黏膜下層和黏膜層 。平滑肌層的外層為縱行肌纖維 ，內層為環形肌纖維 ，兩者都以螺旋式走行 ，它們以收縮和舒張來完成腸的機械性消化 。黏膜層又分為3層 ：靠近黏膜下層的是一層平滑肌 ，稱為黏膜肌層 。其次為結締組織 ，又稱為固有層 。後麵向腸腔的是一層柱狀上皮細胞構成的黏膜 。成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 。成纖維細胞較大 ，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔腸成纖維采用膠原酶-聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔腸成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔腸成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠聚集蛋白聚糖(AGC)檢測試劑盒  ，英文名 ： AGC ELISA Kit

Monkey Vascuoar endothelial cell growth factor receptor -3 (VEGFR-3) ELISA Kit血管內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)檢測試劑盒

RatterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 大鼠末端補體複合物C5b-9(TCCC5b-9)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforFree-T3ELISAKit大鼠遊離三甲狀腺原

細胞活力藍色熒光檢測試劑盒50次

RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

APOA1重組小鼠 ApoA1 蛋白 Protein

蛋白二硫鍵異構酶(PDI)重組蛋白 Recombinant Protein Disulfide Isomerase (PDI)

RPRD1B重組人 RPRD1B 蛋白 Protein

IFNL1 Protein Human 重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

SELL Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白

AATK peptide 細胞凋亡關聯酪激酶抗原 0.5mgAATK peptide 細胞凋亡關聯酪激酶抗原

IFNL1 Protein Human 重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白

OMG重組小鼠 OMGP / OMG 蛋白 (aa 1-245, His 標簽) Protein

COLEC12 Protein Rat 重組大鼠 CLP1 / COLEC12 蛋白

CXCL10重組人 CXCL10 / Crg-2 蛋白 Protein

豌豆凝集素(PSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cardiac anscription factor GATA4 大鼠心肌轉錄因子GATA4

Humanai-insulieceptoraibody,AIRAELISAKit 人抗胰島素受體抗體(AIRA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MB檢測試劑盒人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織C-TAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProstaticAcidPhosphatase ，PAPELISAKit人前列腺酸性0酸酶(PAP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔腸成纖維細胞肽酶抑製因子3   英文名稱 ：   Human Peptidase Inhibitor 3   規格 ：      英文縮寫 ：   PI-3

過氧化物酶體增殖物活化受體γ   英文名稱 ：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   規格 ：      英文縮寫 ：   PPARγ

0酸化SMAD2/3抗體   英文名稱 ：   Human Phosphor Mothers Against Decapeaplegic Homolog 2/3 aibody   規格 ：      英文縮寫 ：   PSMAD2/3 Ab

0酸化核因子κB   英文名稱 ：   Human phosphor-Nuclear Factor kappa B   規格 ：      英文縮寫 ：   pNFκB

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。