老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

兔表皮角化分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用
。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层
、透明层和角质层。表皮角化细胞（KC）是构成表皮的主要细胞成分，在体内处于不断增殖过程中，分裂的角化细胞主要位于其基底层，少数位于棘细胞层
。随着向表层的推移，细胞的分化程度逐渐增加，并丧失分裂活性。

方法简介
：

实验室分离的兔表皮角化上皮先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔表皮角化上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性


：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性
：可传1-3代左右；2代以内状态佳

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔表皮角化上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况


，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

兔子层连蛋白/板层素(LN)ELISA 试剂盒

Human vascular endothelial cell growth factor C (VEGF-C) ELISA Kit 人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)检测试剂盒

Humanai-gangliosesideaibody,GM1ELISAKit 人抗抗体(GM1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanErythropoietin,EPO检测试剂盒人红细胞生成素(EPO)检测试剂盒规格

：96T/48T

组织RSK3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanOsteogenicGrowthPeptide
，OGPELISAKit人成骨生长肽(OGP)检测试剂盒规格：96T/48T

CD86重组大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)

IL27 Protein Human 重组人 IL27 / Interleukin-27 蛋白

CD86重组大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein

HDAC8 Protein Mouse 重组小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白

HSPD1重组人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 标签) Protein

豚鼠干扰素α(IFNα)检测试剂盒 ，英文名： IFNα ELISA Kit

Calcium channel aibody (VGCC) ELISA Kit 人钙离子通道抗体(VGCC)检测试剂盒

RabbitCoisolELISAKit 兔子(Coisol)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBA(HumanBlockingaibody)ELISAKit人封闭抗体

线虫基因组DNA分离试剂盒20次

Rabbitbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit兔骨形成蛋白(BMPs)检测试剂盒规格：96T/48T

兔表皮角化上皮细胞人转铁蛋白（F）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转录因子抗体-1(ATF-1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转甲状腺素蛋白(T)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装