實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔背根神經元分離自脊椎背根神經節 ；感覺神經母細胞發出軸突 ，呈束狀 ，左右對稱地從神經管的背部進入 ，此時的脊神經節即改稱為背根神經節 。神經係統基本的結構和功能單位是神經元 ，即神經細胞 ，其大小和外觀在中樞神經係統中差異很大 。但都具有胞體和樹突 、軸突 。胞體又叫核周體 ，內含神經絲 、微管 、內質網 、遊離核糖體和一個有明顯核仁的核 。一些大神經元突起的粗麵內質網可用Nissl染色顯示 ，在光鏡下是灰藍色斑塊狀 ，稱為尼氏小體 。樹突和軸突是神經元的突起 ，能在神經元之間傳遞電衝動 ，突起的大小和形態各不相同 ，很難用常規的顯微鏡鑒別 。脊髓背根神經節是周圍神經的主要傳入神經元 ，是感覺信號傳導的中繼站 。背根神經元細胞的獲取較為困難 ，需要在盡可能短的時間內通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經節組織 。神經組織體外培養方法是當代神經科學一項很有價值的研究手段 ，背根神經節富含周圍神經係統感覺神經元 ，已廣泛用於軸突的導向及再生 、中樞及周圍神經係統的髓鞘形成 、神經營養因子作用及受體分布 、神經細胞衰老機製、基因治療 、組織工程等神經科學的研究 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔背根神經元采用膠原酶-聯合消化法 、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑製法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔背根神經元經β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml）

培養基 ：含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：神經元細胞樣

傳代特性 ：屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 ：0.125%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔背根神經元體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ，，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠轉縮酶(TALDO1)檢測試劑盒  ，英文名 ： TALDO1 ELISA Kit

Mice of aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 小鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)檢測試劑盒

Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISAKit 小鼠主要組織相容性複合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAkit人白血病抑製因子

氨基酸補充溶液(10X)100毫升

ELISAKitATGA/TGAB大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182 0.5mgphospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide 0酸化原活化蛋白激酶p38抗原

UCHL3重組人 UCHL3 / UCH-L3 蛋白 Protein

IL15 Protein Human 重組人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白

PVRL2 Protein Human 重組人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白

phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182 0.5mgphospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide 0酸化原活化蛋白激酶p38抗原

IL15 Protein Human 重組人 IL-15 / IL15 / Interleukin 15 蛋白

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

PVRL2 Protein Human 重組人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 蛋白

UCHL3重組人 UCHL3 / UCH-L3 蛋白 Protein

豚鼠腎素(Renin)檢測試劑盒  ，英文名 ： Renin ELISA Kit

Human dengue fever aibody (DF-Ab) ELISA Kit 人登革熱抗體(DF-Ab)檢測試劑盒

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細菌尼羅紅染色試劑盒100次

RabbitLysozyme,LZMELISAKit兔(LZM)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔背根神經元細胞上腺素   英文名稱 ：   Adrenalin/   英文縮寫 ：   ADR   規格 ：  

晚期糖基化終末產物   英文名稱 ：   advanced glycosylation end products   英文縮寫 ：   AGEs   規格 ：  

0酸化AKT蛋白   英文名稱 ：   phosphorylation AKT   英文縮寫 ：   p-AKT   規格 ：  

轉錄因子AP-1   英文名稱 ：   anscription Factors AP-1   英文縮寫 ：   AP-1   規格 ：