實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人子宮內膜上皮分離自子宮組織 ；子宮是孕育胎兒的器官，位於盆腔中部 ，膀胱與直腸之間 ，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化 。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶 、盆膈 、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持 ，這些結構受損或鬆弛時 ，可以引起子宮脫垂 。子宮內膜即黏膜 ，由上皮（屬單層柱狀上皮 ，有分泌細胞和纖毛細胞二種）和固有膜（由結締組織構成，其內有大量的星形細胞 ，稱為基質細胞）組成 ，子宮內膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層 ，功能層較厚 ，約占內膜厚度的4/5 ；基底層較薄較致密 ，約占1/5 ，功能層可剝脫 ，而基底層不可剝脫 。子宮內膜上皮細胞主要功能 ：①子宮內膜亦稱子宮黏膜 ，是指構成哺乳類子宮內壁的一層 ；②子宮內膜對動情素和孕激素都起反應 ，因此可隨著性周期（發情周期 、月經周期）發生顯著的變化 。子宮內膜與胚胎附植密切相關 ，在生殖生理的研究中占重要地位 。在胚胎與母體“對話"的過程中 ，子宮內膜上皮細胞充當了極其重要的角色 。子宮內膜構成雌性哺乳動物子宮壁的內層 ，位於子宮腔麵 ，在動物生殖生理活動中占有重要地位 。子宮和子宮內膜是維持雌性動物生理功能和生育能力的重要器官 ，子宮內膜的再生修複是子宮的重要生理功能 。體外培養的子宮內膜上皮細胞對於研究其生理功能 、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人子宮內膜上皮采用膠原酶消化法 ，結合上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人子宮內膜上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人真胰島素(TI)ELISA 試劑盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人腫瘤壞死因子α轉化酶(TACE)檢測試劑盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH檢測試劑盒人免疫反應性生長激素(irGH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織基質金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量檢測試劑盒20次(10樣本)

HumanleukocyteaigenA ，HLA-AELISAKit人類白細胞抗原A(HLA-A)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶聯牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯牛血清白蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

Melamine/BSA 三聚胺偶聯牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶聯牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重組人 ING4 蛋白

EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

豚鼠白介素8(IL-8)檢測試劑盒  ，英文名 ： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)檢測試劑盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β內啡肽受體

細菌血液瓊脂平板50個

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔熱休克蛋白20(HSP-20)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人子宮內膜上皮細胞人脂蛋白a檢測試劑盒   人脂蛋白a試劑盒   規格型號 ：96T/48T   人脂蛋白a試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人脂蛋白a試劑盒 、人脂蛋白a 檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

人脂阿拉伯甘露聚糖檢測試劑盒   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒   規格型號 ：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人脂阿拉伯甘露聚糖試劑盒 、人脂阿拉伯甘露聚糖檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

人正常T細胞表達和分泌因子檢測試劑盒   人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒   規格型號 ：96T/48T   人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人正常T細胞表達和分泌因子試劑盒 、人正常T細胞表達和分泌因子檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

人整合素連接激酶1檢測試劑盒   人整合素連接激酶1試劑盒   規格型號 ：96T/48T   人整合素連接激酶1試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：檢測試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：人整合素連接激酶1試劑盒 、人整合素連接激酶1 檢測試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。