細胞簡介 ：

人子宮頸上皮分離自子宮頸組織 ；子宮頸位於子宮下部 ，近似圓錐體 ，上端與子宮體相連 ，下端深入陰道 。陰道頂端的穹隆又將子宮頸分為兩部分 ：宮頸突入陰道的部分稱宮頸陰道部 ，在陰道穹隆以上的部分稱宮頸陰道上部 。宮頸的中央為前後略扁的長梭性管腔 ，其上端通過宮頸內口與子宮腔相連 ，其下端通過宮頸外口開口於陰道 。內外口之間即宮頸管 。宮頸的大小與宮體比例隨年齡及內分泌狀態等而變化 ；宮頸壁由黏膜 、肌層和外膜組成 。子宮頸可有多種疾病 ，包括胚胎發育異常 、炎症 、瘤樣病變 、良性腫瘤 、惡性腫瘤 、損傷 、宮頸性不孕 、輔助生育技術 、宮頸與性 、宮頸妊娠等許多問題 ，體外培養的子宮頸上皮細胞對於研究其生理功能 、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人子宮頸上皮采用膠原酶消化法，結合上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人子宮頸上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠輕肽鐵蛋白(FTL)檢測試劑盒  ，英文名 ： FTL ELISA Kit

Mouse angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 小鼠血管生成素1(ANG-1)檢測試劑盒

Ratprostatespecificaigen,PSAELISAKit 大鼠前列腺特異性抗原(PSA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGSH-Pxkit(human)人過氧化物酶檢測試劑盒

細胞沉默調節蛋白3(SI3)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit大鼠原激活肽(TAP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標簽)

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原 0.5mgCD3 epsilon peptide CD3 epsilon(抗原)

HNMT Protein Human 重組人 HNMT / Histamine N-methyltransferase 蛋白 (GST 標簽)

CLEC6A重組小鼠 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 蛋白 Protein

CD14 Protein Rat 重組大鼠 CD14 蛋白

CCDC134重組人 CCDC134 蛋白 Protein

小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)檢測試劑盒 96T/48T

Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)檢測試劑盒

HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCollagenaseTypeII檢測試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織ABL1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人子宮頸上皮細胞兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(ADR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。