老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人主动脉平滑肌分离自主动脉组织；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为：升主动脉起于左心室，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉，以上为胸主动脉


，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉
；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内
、外动脉
。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一
，呈梭形、不规则形、三角形或扇形
，核卵圆形
、居中

；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形

，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点
。主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用
，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象
，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点

；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能
、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的人主动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人主动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

兔子凋亡诱导因子(AIF)ELISA 试剂盒

Human vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 人血管活性肠肽(VIP)检测试剂盒

Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit 人抗0壁酸抗体(TA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanepidermalkeratin,EK检测试剂盒人表皮角蛋白(EK)检测试剂盒规格：96T/48T

组织PRAK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPancreastatinELISAKit人胰抑制素(Pancreastatin)检测试剂盒规格


：96T/48T

ADAM15重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

嗅素4(OLFM4)重组蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 标签)

嗅素4(OLFM4)重组蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

IL22RA2 Protein Human 重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

ADAM15重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

豚鼠钩端IgG(Leptospira)检测试剂盒 ，英文名
： Leptospira ELISA Kit

Human toxic shock syndrome toxin 1 iegrated (TSST-1) ELISA Kit 人毒性休克综合征毒素1(TSST-1)检测试剂盒

RabbitMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 兔子巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGFELISAKit大鼠碱性成纤维生长因子

细菌色肉汤500毫升

RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit兔子白介素1(IL-1)检测试剂盒规格：96T/48T

人主动脉平滑肌细胞人状瘤病毒抗体IgG(HPV-IgG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人状瘤病毒抗体(HPV)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人瘤病毒58（HPV-58）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人瘤病毒18（HPV-18）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装