細胞簡介 ：

人真皮微血管內皮分離自真皮組織 ；真皮 ，位於表皮深層 ，向下與皮下組織相連 ，真皮結締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起 ，埋於基質內 。其內分布著各種結締組織細胞和大量的膠原纖維彈性纖維 ，使皮膚既有彈性 ，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網狀層 。真皮的結構組成是膠原蛋白 、彈性纖維以及基質。微血管內皮細胞（MEC）在炎症反應 、腫瘤生長 、創麵愈合過程中起著非常重要的作用 。在創麵愈合研究領域 ，由於表皮細胞 、真皮成纖維細胞體外培養技術的成熟 ，人們對這兩種細胞早已進行了大量深入的研究 。與之相比 ，對參與創麵愈合過程的另一種主要細胞——真皮微血管內皮細胞 ，則因其體外分離培養技術的困難而使相關的研究受限 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人真皮微血管內皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法 、後通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人真皮微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠熱休克蛋白β8(HSPβ8)檢測試劑盒  ，英文名 ： HSPβ8 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 小鼠血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)檢測試劑盒

RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGuineapigImmunoglobulinG,IgGELISAKit豚鼠免疫球蛋白G

細胞長鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit大鼠腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein

0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)

IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein

CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白

HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)

CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白

CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein

HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein

小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human pemphigus foliaceus (PF) ELISA Kit 人落葉型天皰瘡抗體(PF)檢測試劑盒

HumanCompleme1q,C1qELISAKit 人補體1q(C1q)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

DuckIerleukin1,IL-1檢測試劑盒鴨白介素1(IL-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載體/DNA產物去0酸化處理試劑盒10次

Mousedeoxypyridinoline,DPDELISAKit小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人真皮微血管內皮細胞小鼠神經營養因子3(-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠神經營養因子4(-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨保護素(OPG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠B因子(BF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。