細胞簡介：

人牙齦上皮分離自牙齦組織 ；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織 ，呈粉紅色 、有光澤 、質堅韌 。牙齦邊緣稱為齦緣 ，正常呈月芽形 。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝 。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突 。也叫齒齦 ，通稱牙床 ；是指包住齒頸的黏膜組織 ，粉紅色 ，內有很多血管和神經 。牙齦上皮長期被認為是抵禦口腔中持續存在的細菌的被動免疫屏障 ，隨著對牙周致病菌的不斷認識 ，發現牙齦上皮不僅僅是抵禦微生物的物理屏障 ，上皮細胞還可以分泌抗菌多肽 ，參與先天性免疫 。牙齦上皮作為牙周組織的道屏障，在抵禦牙周炎細菌入侵的過程中發揮了重要作用 ，建立正常牙齦上皮細胞體外培養體係 ，將為各種牙齦上皮相關的研究提供穩定的實驗模型 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人牙齦上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人牙齦上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：上皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人牙齦上皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP3)檢測試劑盒  ，英文名 ： IGFBP3 ELISA Kit

Mouse visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 小鼠內髒脂肪特異性絲蛋白酶抑製劑(vaspin)檢測試劑盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 小鼠血管內皮細胞生長因子(VEGF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit人cAMP反應元件結合蛋白

細胞AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitALP-B大鼠骨特異性堿性0酸酶B

IL20RB重組大鼠 IL20RB 蛋白 Protein

GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7 0.5mgGPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 0脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽)

CD28重組人 CD28 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

CLEC10A Protein Human 重組人 CLEC10A / MGL1 / CD301 蛋白 (Fc 標簽)

EPHB1 Protein Mouse 重組小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His & GST 標簽)

GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7 0.5mgGPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 0脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽)

CLEC10A Protein Human 重組人 CLEC10A / MGL1 / CD301 蛋白 (Fc 標簽)

IL20RB重組大鼠 IL20RB 蛋白 Protein

EPHB1 Protein Mouse 重組小鼠 EphB1 / EPHT2 蛋白 (His & GST 標簽)

CD28重組人 CD28 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽) Protein

小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶(STK)檢測試劑盒 96T/48T

Rat myosin (Myosin) ELISA Kit 大鼠肌球蛋白(Myosin)檢測試劑盒

Humanneuraminidase,NAELISAKit 人神經酶(NA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Duckai-prothrombinsaibodies,aPT1/aPT2檢測試劑盒鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞樣品蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

Mousedopamine,DAELISAKit小鼠多巴胺(DA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人牙齦上皮細胞小鼠結合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠結合蛋白(RBP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠生長因子(GH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠(SS)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。