實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人外周血淋巴分離自外周血 ；外周血是除骨髓之外的血液 ，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血幹細胞釋放到血液中 ，再在從血液中提取分離得到造血幹細胞 ，老哥俱樂部把這樣得到的幹細胞稱為外周血幹細胞 ，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念 。淋巴細胞（lymphocyte）是白細胞的一種 ，是體積小的白細胞 。其由淋巴器官產生 ，主要存在於淋巴管中循環的淋巴液中 ，是機體免疫應答功能的重要細胞成分 ，是淋巴係統幾乎全部免疫功能的主要執行者 ，是對抗外界感染和監控體內細胞變異的一線“士兵" 。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞係 ，按其發生遷移 、表麵分子和功能的不同 ，可分為T淋巴細胞（又名T細胞） 、B淋巴細胞（又名B細胞）和自然殺傷（NK）細胞 。T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞 ，它們的初來源是相同的 ，都來自造血組織 。T淋巴細胞隨血循環到 ，在激素等的作用下成熟，而B細胞在骨髓中分化成熟 。當受抗原刺激後 ，T淋巴細胞即轉化為淋巴母細胞 ，再分化為致敏T淋巴細胞 ，參與細胞免疫 ，其免疫功能主要是抗胞內感染 、瘤細胞與異體細胞等 ；而B淋巴細胞是先轉化為漿母細胞 ，再分化為漿細胞 ，產生並分泌免疫球蛋白（抗體） ，參與體液免疫 ，其功能是產生抗體 ，提呈抗原 ，以及分泌細胞內因子參與免疫調節 ；NK細胞不依賴抗原刺激而自發地發揮細胞毒效應 ，具有殺傷靶細胞的作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人外周血淋巴采用取外周血 、通過密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人外周血淋巴經過檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠白細胞抗原DR(HLA-DR)檢測試劑盒  ，英文名 ： HLA-DR ELISA Kit

Lactamase inhibitors (BLI) ELISA Kit 小鼠β內酰胺酶抑製劑(BLI)檢測試劑盒

ELISA 小鼠Foxp3(mouse Foxp3)  進口分裝

CLIAKitforirGH(HumanImmunoreactivegrowthhormone)ELISAKit人免疫反應性生長激素

通用型(CO2)濃度酶偶聯反應比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitTNF-α大鼠腫瘤壞死因子α

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

phospho-Smad2(p-Ser465 0.5mgphospho-Smad2(p-Ser465)petide 0酸化Smad2抗原

COCH重組人 Cochlin / COCH 蛋白 Protein

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)

phospho-Smad2(p-Ser465 0.5mgphospho-Smad2(p-Ser465)petide 0酸化Smad2抗原

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)

COCH重組人 Cochlin / COCH 蛋白 Protein

豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cytotoxin (CTX) ELISA Kit 人細胞毒素(CTX)檢測試劑盒

Humanai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanC-typelectindomainfamily4membere,CLEC4E檢測試劑盒人C型凝集素結構域家族4成員E(CLEC4E)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織EPHB2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProinsulin,PIELISAKit人胰島素原(PI)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人外周血淋巴細胞三0酸腺苷酶   英文名稱 ：   Rat Adenosine iphosphate   規格 ：      英文縮寫 ：   ATP

大鼠半胱天冬蛋白酶3   英文名稱 ：   active cysteine-aspaic acid protease-3   規格 ：      英文縮寫 ：   Active Caspase-3

大鼠半胱天冬蛋白酶7   英文名稱 ：   active cysteine-aspaic acid protease-7   規格 ：      英文縮寫 ：   Active Caspase-7

大鼠半胱天冬蛋白酶8   英文名稱 ：   active cysteine-aspaic acid protease-8   規格 ：      英文縮寫 ：   Active Caspase-8