老哥俱乐部

细胞简介：

人外周血白分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，老哥俱乐部把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念
。白细胞（Leukocyte）
，旧称白血球，血液中的一类细胞。根据白细胞的细胞质内有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。前者常简称为粒细胞

，根据其特殊颗粒的染色特性
，又分为中性粒细胞
、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，白细胞也通常被称为免疫细胞
。在显微镜下可以看到
，血细胞中体积比较大

、数量比较少
，具有细胞核；其主要作用是吞噬细菌
、防御疾病。

方法简介：

公司实验室分离的人外周血白采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人外周血白经过检测，且不含有HIV-1、HBV

、HCV

、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖

；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养

：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

小鼠白介素-12(mouse IL-12)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠白介素-13(mouse IL-13)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠白介素-15(mouse IL-15)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠白介素-17(mouse IL-17)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠环0酸鸟苷(cGMP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat phosphorylated protein kinase C (P-PKC) ELISA Kit 大鼠0酸化蛋白激酶C(P-PKC)试剂盒

humangonadoopin-releasinghormone,GHELISAKit 人释放激素(GH)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-myelinaibodyIgA,AMAIgA试剂盒人抗髓0脂抗体IgA(AMAIgA)试剂盒规格：96T/48T

植物氢ATP酶(H+-ATPase)总活性比色法定量试剂盒20次

humanuridinephosphorylase1,UPP1ELISAKit人尿核苷0酸化酶1(UPP1)试剂盒规格：96T/48T

NS1重组甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural / NS1 蛋白 Protein

Ractopamine/BSA 莱克多巴胺与牛血清白蛋白偶联物 1mgRactopamine/BSA 莱克多巴胺与牛血清白蛋白偶联物

TNFRSF4重组人 TNFRSF4 / OX40 / CD134 蛋白 Protein

ERBB4 Protein Human 重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白

ESAM Protein Human 重组人 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 (Fc 标签)

FAS (Apo-a1; CD95; 0.5mgFAS (Apo-a1; CD95;)(抗原) 载脂蛋白-a1

ERBB4 Protein Human 重组人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白

VEGFC重组大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, His 标签) Protein

CD19 Protein Mouse 重组小鼠 CD19 / Leu-12 蛋白

CSTB重组人 Cystatin B / CSTB 蛋白 Protein

人外周血白细胞大鼠神经元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)试剂盒 ，英文名
： NPTX2 ELISA Kit

Mouse iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 小鼠细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)试剂盒

RatAi-thyroid-globulinaibody,ATGA/TGABELISAKIT 大鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHBsAb(立可读)乙型肝表面抗体

细胞β-内酰胺酶报告基因活性荧光定量试剂盒20次

SheepIerleukin6,IL-6ELISAKit绵羊白介素6(IL-6)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞


，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。