老哥俱乐部

细胞简介
：

人退行性椎间盘髓核分离退行性椎间盘组织
；椎间盘是位于脊柱两椎体之间

，分为中央部的髓核
，富于弹性的胶状物质；周围部的纤维环，由多层纤维软骨环按同心圆排列。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成
，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠
，使纤维环成为坚实的组织

，能承受较大的弯曲和扭转负荷

。髓核
，是乳白色半透明胶状体，富于弹性
，为椎间盘结构的一部分
，位于两软骨板与纤维环之间
。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质
。婴幼儿时期的髓核含水量为80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生时体积大而松散
，位于椎间盘的中央
，至成年时位置移至椎间盘的中后部
；在成年以前构成髓核的主要物质是大量蛋白多糖复合体、胶原纤维和纤维软骨，随着年龄的增长
，髓核中的蛋白多糖解聚增多
，水分逐渐减少
，胶原增粗并逐渐被纤维软骨所替代。

方法简介：

公司实验室分离的人退行性椎间盘髓核采用胶原酶-混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶

。

质量检测

公司实验室分离的人退行性椎间盘髓核经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每3-4天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠组蛋白H2A(H2A)检测试剂盒 ，英文名： H2A ELISA Kit

Mouse ai thyroglobulin aibody (ATGA/TGAB) ELISA Kit 小鼠抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)检测试剂盒

MouseIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanlymphocytefunctionassociatedaigen2,LFA-2ELISAKit人淋巴细胞功能相关抗原2

土壤元素荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitdsDNA大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体

CD63重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 标签) Protein

CT (Calcitonin 0.5mgCT (Calcitonin ) 降钙素(抗原)

FCER2重组人 CD23 / FCER2 蛋白 Protein

H1F0 Protein Human 重组人 H1F0 / Histone H1 蛋白

PCSK9 Protein Mouse 重组小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白

CT (Calcitonin 0.5mgCT (Calcitonin ) 降钙素(抗原)

H1F0 Protein Human 重组人 H1F0 / Histone H1 蛋白

CD63重组大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 标签) Protein

PCSK9 Protein Mouse 重组小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白

FCER2重组人 CD23 / FCER2 蛋白 Protein

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)检测试剂盒

Humanplacealactogen,HPLELISAKit 人胎盘催乳素(HPL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanChromogranin,CgA检测试剂盒人嗜铬蛋白A(CgA)检测试剂盒规格：96T/48T

总脂肪酶(lipase)定量检测试剂盒50次

Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit人抗唾液腺导管组织抗体(SDA)检测试剂盒规格：96T/48T

人退行性椎间盘髓核细胞兔血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1   英文名称：   Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1   规格
：      英文缩写：   LOX-1

兔脂氧合酶同工酶   英文名称
：   Rabbit Lipoxygenase Isozymes   规格：      英文缩写
：   LOXI

兔基质金属蛋白酶 1   英文名称
：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   规格
：      英文缩写：   MMP-1

兔基质金属蛋白酶 2   英文名称
：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   规格：      英文缩写
：   MMP-2

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。