實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人腎癌組織源分離自癌組織 ；癌（cancer）是指起源於上皮組織的惡性腫瘤 ，是惡性腫瘤中常見的一類 。相對應的 ，起源於間葉組織的惡性腫瘤統稱為肉瘤 。有少數惡性腫瘤不按上述原則命名 ，如腎母細胞瘤 、惡性畸胎瘤等 。一般人們所說的“癌症"習慣上泛指所有惡性腫瘤 。癌症具有細胞分化和增殖異常 、生長失去控製 、浸潤性和轉移性等生物學特征 ，其發生是一個多因子 、多步驟的複雜過程 ，分為致癌 、促癌 、演進三個過程 ，與吸煙 、感染 、職業暴露 、環境汙染 、不合理膳食 、遺傳因素密切相關 。癌細胞，是一種變異的細胞 ，是產生癌症的病源。癌細胞與正常細胞不同 ，有無限增殖 、可轉化和易轉移三大特點，能夠無限增殖並破壞正常的細胞組織 。癌細胞除了分裂失控外（能進行多極分裂） ，還會局部侵入周圍正常組織甚至經由體內循環係統或淋巴係統轉移到身體其他部分 。分惡性和良性兩種 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的癌組織源采用膠原酶消化 、經Percoll離心純化製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人腎癌組織源經檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠Kruppel樣因子2(KLF2)檢測試劑盒  ，英文名 ： KLF2 ELISA Kit

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Horsemajorhistocompatibilitycomplex,MHC/ELAELISAKit 馬主要組織相容性複合體(MHC/ELA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCAM(Humancalmodulin)ELISAKit人鈣調素

細菌β-半乳糖苷酶活性原位染色試劑盒40次

Ratacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit大鼠乙酰受體抗體(AChRab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

TNF重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

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LY6D重組人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 標簽) Protein

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HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

信號素3A(SEMA3A)重組蛋白 Recombinant Semaphorin 3A (SEMA3A)

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TNF重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

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豚鼠堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)檢測試劑盒  ，英文名 ： FGF2 ELISA Kit

Human calmodulin binding protein (CALD) ELISA Kit 人鈣調結合蛋白(CALD)檢測試劑盒

rabbitImmunoglobulinM,IgMELISAKit 兔子免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBacillusthuringiensis,BTELISAKit蘇雲金芽孢杆菌蛋白

線蟲凍存試劑盒50次

RabbitcardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit兔心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

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人血栓調節蛋白(TM)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human TM (Thrombomodulin) ELISA Kit

人補體因子4(C4)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human C4 (Compleme Compone 4) ELISA Kit

人鐵蛋白(FE)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human FE (Ferritin) ELISA Kit