實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人前列腺平滑肌分離自前列腺組織 ；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官 ；前列腺是不成對的實質性器宮 ，由腺組織和肌組織構成 。前列腺如栗子 ，底朝上 ，與膀胱相貼 ，尖朝下 ，抵泌尿生殖膈 ，前麵貼恥骨聯合 ，後麵依直腸 。前列腺腺體的中間有尿道穿過 ，扼守著尿道上口 ，所以 ，前列腺有問題時 ，排尿先受影響 。前列腺是機體非常少有的 ，具有內 、外雙重分泌功能的性分泌腺 。作為外分泌腺 ，前列腺每天分泌前列腺液 ，是構成精液主要成分 ；作為內分泌腺 ，前列腺分泌的激素稱為“前列腺素" 。前列腺平滑肌細胞是前列腺的重要結構組成細胞之一 ，在機體的正常生理過程中發揮著重要作用 。前列腺平滑肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形 、三角形或扇形 ，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。

方法簡介：

公司實驗室分離的人前列腺平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人前列腺平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠原激活蛋白激酶14(MAPK14)檢測試劑盒  ，英文名 ： MAPK14 ELISA Kit

Mouse advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化終末產物(AGEs)檢測試劑盒

Ratadiponectin,ADPELISAKit 大鼠脂聯素(ADP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHHCII(umanheparincofactorII)ELISAKit人肝素輔因子Ⅱ

細胞S6KINASE激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitCⅠCP大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽

GAG-P24重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype C, strain 92BR025) Protein

Thiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原 0.5mgThiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原)

IL7R重組人 IL7RA / CD127 蛋白 Protein

ICAM5 Protein Human 重組人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (Fc 標簽)

HRG Protein Human 重組人 HPRG / HRG 蛋白

Thiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原 0.5mgThiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原)

ICAM5 Protein Human 重組人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (Fc 標簽)

GAG-P24重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype C, strain 92BR025) Protein

HRG Protein Human 重組人 HPRG / HRG 蛋白

IL7R重組人 IL7RA / CD127 蛋白 Protein

小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat cyclin D3 (Cyclin-D3) ELISA Kit 大鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)檢測試劑盒

HumanNandrolonePhenylpropionate,NPELISAKit 人苯諾龍/苯去(NP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanconcanavalinA,ConA檢測試劑盒人刀A(ConA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織CDK5/P25激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProteinase3Aibody,PR3AbELISAKit人蛋白酶3抗體(PR3Ab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人前列腺平滑肌細胞兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝