實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人髂動脈內皮分離自髂動脈組織 ；髂總動脈位於人體的盆腔 ，人的髂總動脈有兩條 ，也就是臨床上左右兩條分支 ，它是由腹部主要的動脈演化而來 ，由腹部的腹主動脈沿著人體的脊柱方向向下進行 ，到達第4腰椎後開始分成兩支 ，這就是左右髂總動脈 。動脈是介於心室與毛細血管之間的管道，它接近心室的部分 ，管徑大 ，管壁較厚 。經過反複分支 ，管徑逐漸變小 ，管壁變薄 ，後形成與毛細血管構造相似的毛細血管前小動脈 ，與毛細血管相接 。動脈的管徑大小和管壁的厚薄 ，雖相差很大 ，但構造上均有共同之處 。一般均由3層膜組成 ，內層稱為內膜 ，由內皮及縱行排列的結締組織構成 ；中間的一層稱為中膜 ，由環形排列的組織構成 ；外的一層叫外膜 ，由縱行排列的結締組織構成 。動脈內皮細胞是覆蓋在主動脈內麵的單層細胞 ，可分泌一係列血管活性物質而保持血管穩態 ，當其受到炎症或其它因素刺激後穩態被破壞而導致一些心血管疾病的發生 。因此 ，動脈內皮細胞已成為研究心血管疾病發病機製及治療藥物的工具 。內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞 ，由一層扁平細胞所組成 。它形成血管的內壁 ，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口 。內皮細胞是沿著整個循環係統 ，由心髒直至小的微血管 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人髂動脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人髂動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA 試劑盒

Human urokinase type plasminogen activator (uPA/PLAU) ELISA Kit 人型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)檢測試劑盒

HumanNuclearmaixprotein22,NMP-22ELISAKit 人核基質蛋白22(NMP-22)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigmaixmetalloproteinase9,MMP-9檢測試劑盒豚鼠基質金屬蛋白酶9(MMP-9)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞漿可溶性總蛋白製備試劑盒20次

MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit小鼠腦源性神經營養因子(BDNF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

IL18R1重組小鼠 IL-18R1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原

CSF2重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白

FSTL3 Protein Mouse 重組小鼠 FLRG / Fstl3 蛋白

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白

IL18R1重組小鼠 IL-18R1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

FSTL3 Protein Mouse 重組小鼠 FLRG / Fstl3 蛋白

CSF2重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

豚鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測試劑盒  ，英文名 ： CCK ELISA Kit

Human dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 人多巴胺D2受體(D2R)檢測試劑盒

Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 兔子酯轉移蛋白(CETP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-TG(RabbitBeta-Thromboglobulin)ELISAKit兔子β血小板球蛋白/β血栓環蛋白

細菌銅ATP酶(Cu++-ATPase)活性比色法量檢測試劑盒20次

rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人髂動脈內皮細胞人周期素依賴性激酶7(CDK-7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人周期素依賴性激酶2(CDK-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T