老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人脐静脉血来源内皮祖分离自脐静脉血；内皮祖细胞是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞（Angioblast），是一群具有游走特性
，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞
，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型，不能形成管腔样结构

，其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。研究显示，内皮祖细胞在心脑血管疾病、外周血管疾病、肿瘤血管形成及创伤愈合等方面均发挥重要作用
，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路，EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。

方法简介
：

公司实验室分离的人脐静脉血来源内皮祖采用密度梯度离心、差速贴壁法结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脐静脉血来源内皮祖经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传1-2代；不建议多次传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%

；CO2
，5%

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠生长分化因子5(GDF5)检测试剂盒 ，英文名： GDF5 ELISA Kit

Mouse vitamin K1 (VK1) ELISA Kit 小鼠K1(VK1)检测试剂盒

Ratai-spermaibody,AsAbELISAKit 大鼠抗抗体(AsAb)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHcyELISAKit大鼠同型半胱

细胞VZV(VARICELLAZOSTER)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

人高香草酸(HVA)ELISAKit人腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)检测试剂盒规格：96T/48T

HA重组甲型流感 H14N5 (A/Mallard/Astrakhan(Gurjev)/263/1982) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PARP(poly ADP-ribose polymerase 0.5mgPARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺苷二0酸多聚酶抗原

LYN重组人 Lyn Kinase 蛋白 (GST 标签) Protein

CHST11 Protein Human 重组人 CHST11 / C4ST-1 蛋白

BCAM Protein Human 重组人 BCAM 蛋白 (Fc 标签)

PARP(poly ADP-ribose polymerase 0.5mgPARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺苷二0酸多聚酶抗原

CHST11 Protein Human 重组人 CHST11 / C4ST-1 蛋白

HA重组甲型流感 H14N5 (A/Mallard/Astrakhan(Gurjev)/263/1982) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

BCAM Protein Human 重组人 BCAM 蛋白 (Fc 标签)

LYN重组人 Lyn Kinase 蛋白 (GST 标签) Protein

小鼠酶(CA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human follistatin (FS) ELISA Kit 人卵泡抑素(FS)检测试剂盒

Humanglycosylation-dependecelladhesionmolecule-1,GlyCAM-1ELISAKit 人糖基化依赖的细胞黏附分子(GlyCAM-1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

DeerEndothelialniicoxidesyhase,eNOS检测试剂盒内皮型合成酶(eNOS)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞钙交换体(NCX)蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseEndothelin1,ET-1ELISAKit小鼠内皮素1(ET-1)检测试剂盒规格：96T/48T

人脐静脉血来源内皮祖细胞小鼠酸性粒细胞趋化因子检测试剂盒   小鼠酸性粒细胞趋化因子试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠酸性粒细胞趋化因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠酸性粒细胞趋化因子试剂盒
、小鼠酸性粒细胞趋化因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠小扁结合型甲胎蛋白检测试剂盒   小鼠小扁结合型甲胎蛋白试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠小扁结合型甲胎蛋白试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠小扁结合型甲胎蛋白试剂盒、小鼠小扁结合型甲胎蛋白eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠表皮调节素检测试剂盒   小鼠表皮调节素试剂盒   规格型号

：96T/48T   小鼠表皮调节素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠表皮调节素试剂盒、小鼠表皮调节素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

豚鼠神经肽A检测试剂盒   豚鼠神经肽A试剂盒   规格型号：96T/48T   豚鼠神经肽A试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装）

，产品别名

：豚鼠神经肽A试剂盒、豚鼠神经肽Aeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。