實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人皮層神經元分離自腦皮層組織 ；皮層神經元細胞是構成中樞神經係統結構和功能的基本單位 。神經元是具有長突觸(軸突)的細胞 ，它由細胞體和細胞突起構成 。在長的軸突上套有一層鞘 ，組成神經纖維 ，它的末端的細小分支叫做神經末梢 。細胞體位於腦 、脊髓和神經節中 ，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中 。細胞體是細胞含核的部分 ，其形狀大小有很大差別 ，直徑約4-120微米。核大而圓 ，位於細胞中央 ，染色質少 ，核仁明顯 。細胞質內有斑塊狀的核外染色質 ，還有許多神經元纖維 。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分 ，又可分為樹突和軸突 。每個神經元可以有一或多個樹突 ，可以接受刺激並將興奮傳入細胞體 。每個神經元隻有一個軸突 ，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織 ，如肌肉或腺體 。皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一 ，是大腦進行功能活動調節的基本單位 ，參與動物多種中樞神經係統疾病的病理過程 。通過形態學觀察顯示神經元從貼壁 、伸出突起開始 ；突起逐漸增多 ，而後突起進一步增多並逐漸成網 ，同時細胞胞體增大 ，周邊光暈明顯 。10-12d細胞為豐滿 ，隨後神經元開始裂解 ，突起逐漸減少 ，細胞已退化變性 ，輪廓模糊 ，光暈消失 ，細胞變形 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人皮層神經元采用消化法 、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑製法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人皮層神經元經β-Tubulin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)ELISA 試劑盒

Human ansforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 人轉化生長因子β1(TGF-β1)檢測試劑盒

HumansolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanIerleukin10,IL-10檢測試劑盒人白介素10(IL-10)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織抗壞血酸比色法定量檢測試劑盒20次

Humanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit人胰島澱粉樣多肽(IAPP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PACAP(1-38 Peptide 0.5mgPACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環化酶激活肽 1-38(全蛋白)

CD97重組人 CD97 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ITGA5 & ITGB6 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白

ACVR2B Protein Human 重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標簽)

PACAP(1-38 Peptide 0.5mgPACAP(1-38 Peptide) 腺苷酸環化酶激活肽 1-38(全蛋白)

ITGA5 & ITGB6 Protein Human 重組人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/New York/1/1918) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ACVR2B Protein Human 重組人 ACVR2B / ActivinR-IIB 蛋白 (Fc 標簽)

CD97重組人 CD97 蛋白 (Fc 標簽) Protein

豚鼠白介素1β(IL1β)檢測試劑盒  ，英文名 ： IL1β ELISA Kit

Human cholyglycine (CG) ELISA Kit 人甘膽酸(CG)檢測試劑盒

rabbitLeptin,LEPELISAKit 兔子瘦素(LEP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAELISAKit大鼠抗受體

線粒體複合物III蛋白免疫共沉澱分析試劑盒5次

Rabbitai-glycoproteinaibody,GPELISAKit兔抗糖蛋白抗體(GP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人皮層神經元細胞人早期生長應答蛋白1(EGR1)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human EGR1 (Early Growth Response Protein 1) ELISA Kit

人早期生長應答蛋白2(EGR2)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human EGR2 (Early Growth Response Protein 2) ELISA Kit

人早期生長應答蛋白3(EGR3)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human EGR3 (Early Growth Response Protein 3) ELISA Kit

人早期生長應答蛋白4(EGR4)酶聯免疫吸附測定試劑盒   Human EGR4 (Early Growth Response Protein 4) ELISA Kit