老哥俱乐部

细胞简介
：

人膀胱癌组织源分离自癌组织；癌（cancer）是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中常见的一类

。相对应的

，起源于间叶组织的恶性肿瘤统称为肉瘤。有少数恶性肿瘤不按上述原则命名，如肾母细胞瘤、恶性畸胎瘤等。一般人们所说的“癌症"习惯上泛指所有恶性肿瘤。癌症具有细胞分化和增殖异常
、生长失去控制
、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个多因子
、多步骤的复杂过程
，分为致癌、促癌、演进三个过程，与吸烟
、感染、职业暴露
、环境污染
、不合理膳食
、遗传因素密切相关
。癌细胞，是一种变异的细胞
，是产生癌症的病源

。癌细胞与正常细胞不同
，有无限增殖、可转化和易转移三大特点
，能够无限增殖并破坏正常的细胞组织。癌细胞除了分裂失控外（能进行多极分裂）
，还会局部侵入周围正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。分恶性和良性两种。

方法简介：

公司实验室分离的癌组织源采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人膀胱癌组织源经检测
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化

；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠周期素依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)检测试剂盒 ，英文名
： CDKN1A ELISA Kit

Mouse ai ypsin (AT) ELISA Kit 小鼠抗(AT)检测试剂盒

MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanIPO-38ELISAKit人IPO-38蛋白

微型RNA(miRNA)表达载体连接试剂盒10次

ELISAKitMIP-5大鼠巨噬细胞症蛋白5

KLRK1重组食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白 (aa 78-216, His 标签) Protein

MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3 0.5mgMAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3) 自噬微管相关蛋白轻链3抗原

FCGR3B重组人 CD16b / FCGR3B 蛋白 Protein

GUCA1A Protein Human 重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 (His & GST 标签)

PTN Protein Mouse 重组小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 (Fc 标签)

MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3 0.5mgMAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3) 自噬微管相关蛋白轻链3抗原

GUCA1A Protein Human 重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 (His & GST 标签)

KLRK1重组食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白 (aa 78-216, His 标签) Protein

PTN Protein Mouse 重组小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 (Fc 标签)

FCGR3B重组人 CD16b / FCGR3B 蛋白 Protein

小鼠α干扰素(IFN-α)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat aquaporin 1 (AQP-1) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)检测试剂盒

HumanNeonatalThyroidStimulatingHormone,N-TSHELISAKit 人新生儿促甲状腺素(N-TSH)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanChorionicGonadoophinβ,β-CG检测试剂盒人绒毛膜β(β-CG)检测试剂盒规格：96T/48T

总微型RNA(miRNA)超滤法分离试剂盒10次

HumanSalusinαELISAKit人Salusin-α检测试剂盒规格
：96T/48T

人膀胱癌组织源细胞兔血小板活化因子(rabbit PAF)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔前列腺素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔纤溶酶原激活剂抑制物-1 (rabbit PAI-1)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔相关蛋白A(rabbit PAPP-A)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。