老哥俱乐部

实验报告：

一

、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人脑膜分离自脑膜组织；脑膜是颅骨与脑间的隔膜，一共有三层，由外向内为硬脑膜、蛛网膜和软脑膜。脑膜细胞围绕着大脑
，参与中枢神经系统的正常发育，能稳定脑软膜表面的细胞外基质、组织放射状胶质细胞网络和小脑皮层分层结构。

方法简介：

公司实验室分离的人脑膜采用消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人脑膜经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右

；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

小鼠 IgG(mouse IgG)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 ADI

小鼠类胰岛素样生长因子 -1 (mouse IGF-1)   作用
：   ELISA   规格
：   96T   美国 R&D

小鼠 IGF-II (Mouse IGF-II) ELISA Kit   作用
：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠白介素 -1 a (mouse IL-1 a )   作用
：   ELISA   规格
：   96T   奥地利 Bender

小鼠钙通道阻滞剂(CCB)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 人水通道蛋白4(AQP-4)试剂盒

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 人血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanApolipoproteinC3,ApoC3试剂盒人载脂蛋白C3(ApoC3)试剂盒规格
：96T/48T

植物氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(过氧亚硝基阴离子)20次

Humaoll-likereceptor9,TLR-9ELISAKit人Toll样受体9(TLR-9/CD289)试剂盒规格

：96T/48T

CXADR重组小鼠 CXADR 蛋白 Protein

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂联素受体-2(抗原)

AGER重组人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

FCGR2B Protein Human 重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated

IL13RA1 Protein Rat 重组大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 标签)

Adipo R2(adiponectin receptor 2 0.5mgAdipo R2(adiponectin receptor 2) 脂联素受体-2(抗原)

FCGR2B Protein Human 重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated

CXADR重组小鼠 CXADR 蛋白 Protein

IL13RA1 Protein Rat 重组大鼠 IL13RA1 蛋白 (Fc 标签)

AGER重组人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

人脑膜细胞大鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)试剂盒 ，英文名： SOCS1 ELISA Kit

Mouse glial fibrillary acidic protein (GFAP) ELISA Kit 小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)试剂盒

MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 小鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)试剂盒 96T/48T 进口分装

HSV-IIgM单疱疹Ⅰ型病毒IgM(捕获法二步法)

细胞IRAK4激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-4大鼠白介素4