老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清


，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次


，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1


：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介

：

人脑动脉血管内皮分离自脑动脉组织
；脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环；静脉系多不与同名动脉拌行，所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉
；各级静脉都没有瓣膜
，它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。脑动脉血管内皮细胞主要功能：①维持血管内外的动态平衡；②合成和分泌细胞因子和介质
；③维持凝血和纤溶的动态平衡。

方法简介：

公司实验室分离的人脑动脉血管内皮采用胶原酶-混合消化法并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人脑动脉血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息

：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿


。

公司正在出售的产品：

大鼠组胺H3受体(HRH3)检测试剂盒 ，英文名： HRH3 ELISA Kit

Mouse ai sperm aibody (AsAb) ELISA Kit 小鼠抗抗体(AsAb)检测试剂盒

Mouse8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISAKit 小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanlymphocytefactorELISAKit人淋巴细胞因子

土壤(lithium)化学比色法定量检测试剂盒50次

ELISAKitdsDNA大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体

SERPIND1重组小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原

SRC重组人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 标签) Protein

HAGH Protein Human 重组人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

IL7 Protein Rat 重组大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原 0.5mgCD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/转化生长因子β受体抗原

HAGH Protein Human 重组人 HAGH / GLO2 / Glyoxalase II 蛋白

SERPIND1重组小鼠 SerpinD1 / HCII 蛋白 Protein

IL7 Protein Rat 重组大鼠 IL7 / interleukin 7 蛋白

SRC重组人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)检测试剂盒

Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盘蛋白(PP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancicaicialPemphigoid,CP检测试剂盒人瘢痕性天疱疮抗体(CP)检测试剂盒规格：96T/48T

组(leucine)含量比色法定量检测试剂盒20次

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISAKit人S100钙结合蛋白A9/钙粒蛋白B(S100A9)检测试剂盒规格：96T/48T

人脑动脉血管内皮细胞兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔(NO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔补体蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔p物质(SP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T