老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

人卵巢颗粒分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官

，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡
，卵泡呈黄色

，卵巢表面密布血管
。卵巢的大小与年龄和产卵期有关

。大多数脊椎动物有两个卵巢
，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构

，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能
。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织
。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质
。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管
、淋巴管和神经。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞
，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵
、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。卵巢颗粒细胞是卵泡内的大细胞群
，也是主要的功能细胞，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖
，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起，尤其在卵泡发育后期
，此外，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成
，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境。细胞形状呈圆形或椭圆形
。

方法简介：

公司实验室分离的人卵巢颗粒采用先机械分离
，而后胶原酶消化，后差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人卵巢颗粒经FSHR免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%

；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

人抑制素B(INH-B)ELISA 试剂盒

Human ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 人转化生长因子β2(TGFβ2)检测试剂盒

HumanDickkopf1,DKK1ELISAKit 人Dickkopf1(DKK1)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerleukin11,IL-11检测试剂盒人白介素11(IL-11)检测试剂盒规格：96T/48T

组织科萨基病毒A(CoxsackievirusA)定量PCR扩增检测试剂盒20次

HumanIschemiaModifiedAlbumin,IMAELISAKit人缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒规格：96T/48T

CTLA4重组小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉样肽1-16(多肽蛋白)

NRG1重组人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 标签) Protein

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重组人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

ADAM17 Protein Rat 重组大鼠 ADAM17 蛋白

Beta-Amyloid(1-16 0.5mgBeta-Amyloid(1-16) β淀粉样肽1-16(多肽蛋白)

ITGA5 & ITGB1 Protein Human 重组人 ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

CTLA4重组小鼠 CTLA4 / CD152 蛋白 Protein

ADAM17 Protein Rat 重组大鼠 ADAM17 蛋白

NRG1重组人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 标签) Protein

豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管紧张素转化酶(ACE)检测试剂盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗肾小球基底膜抗体(GBM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclophosphamide,CTX检测试剂盒人环0酰胺(CTX)检测试剂盒规格：96T/48T

组织HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR扩增检测试剂盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰质病毒IgG(PV-IgG)检测试剂盒规格：96T/48T

人卵巢颗粒细胞人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人肠三叶因子(ITF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人Dickkopf1(DKK1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人11(KLK11)ELISAKit   ELISA.   96T/48T