細胞簡介 ：

人口腔角質形成分離自口腔組織 ；口腔黏膜在組織學形態上分為上皮 、固有層和黏膜下層 ；口腔黏膜上皮細胞按是否參與角化被分為角質形成細胞與非角質形成細胞 ，主要由角質形成細胞構成 ；前者組成複層鱗狀上皮 ，後者遊離分布於上皮層內 。根據在口腔內部位的不同 ，複層鱗狀上皮可分為角化 、不全角化或無角化型等幾類 。以角化型上皮為例 ，由上皮的深麵至淺麵可分為基層 、棘層 、粒層及角化層等四層 。

方法簡介 ：

實驗室分離的人口腔角質形成采用先機械分離法 、後膠原酶消化法並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的人口腔角質形成經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 ：基礎培養基 ，含FBS 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：上皮細胞樣

傳代特性 ：2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

人口腔角質形成體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠補體C5a(C5a)檢測試劑盒  ，英文名 ： C5a ELISA Kit

Mouse alpha 2 aiplasmin (alpha 2-AP) ELISA Kit 小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促紅細胞生成素(mouse EPO)  進口分裝

CLIAKitforKLK8(Humanurokinase-typeplasminogenactivator)ELISAKit人8

通用型鮑氏誌賀菌Shigellaboydii試劑盒20次

ELISAKitHD大鼠組織蛋白去乙酰化酶

IL12RB2重組小鼠 IL12RB2 / IL12R-beta 2 蛋白 Protein

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J 0.5mgApo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原

SHH重組人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 198-462, His 標簽) Protein

HTRA2 Protein Human 重組人 HTRA2 / OMI 蛋白

REG4 Protein Rat 重組大鼠 REG4 蛋白 (Fc 標簽)

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小鼠BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat iercellular adhesion molecule 2 (ICAM-2/CD102) ELISA Kit 大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)檢測試劑盒

Humanangiotensinogen,aGTELISAKit 人血管緊張素原(aGT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCompleme7,C7檢測試劑盒人補體7(C7)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinA ，SP-AELISAKit人肺表麵活性物質相關蛋白A(SP-A)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人口腔角質形成細胞兔兒茶酚胺(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交聯物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔交聯物(PY)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。