老哥俱乐部

细胞简介：

人结肠癌组织源分离自患有结肠癌病人的结肠癌组织；结肠癌是常见的发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处，以40～50岁年龄组发病率高，男女之比为2～3

：1。发病率占胃肠道肿瘤的第3位。结肠癌主要为腺癌
、黏液腺癌
、未分化癌
。大体形态呈息肉状、溃疡型等
。结肠癌可沿肠壁环行发展，沿肠管纵径上下蔓延或向肠壁深层浸润，除经淋巴管

、血流转移和局部侵犯外
，还可向腹腔内种植或沿缝线、切口面扩散转移
。慢性结肠炎患者
、结肠息肉患者、男性肥胖者等为易感人群。人结肠癌组织源不仅广泛应用于分子
、细胞生物学和生物医学基础研究
，如蛋白质组学
、基因组学
、细胞株（系）研究、DNA
，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等
。人结肠癌组织源在生物医药领域有不可替代性作用
。

方法简介：

公司实验室分离的癌组织源采用胶原酶消化、经Percoll离心纯化制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人结肠癌组织源经检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%；CO2，5%

实验报告

：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬


，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

猪肌球蛋白轻链0酸酶(MLCP)ELISA 试剂盒

Neuroophic factor glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)检测试剂盒

Porcineacetylcholine,ACHELISAKit 猪乙酰(ACh)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAlphaNAG(MouseAlphaN-acetylglucosaminidase)ELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶

血液离子(K)浓度化学比色法定量检测试剂盒20次

PlaIndole-3-aceticacid,IAAELISAKit植物吲哚乙酸(IAA)检测试剂盒规格
：96T/48T

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

PEPT1 (Peptide-transporters 1 0.5mgPEPT1 (Peptide-transporters 1) 肠道肽转运蛋白(小肽转运蛋白)多肽

DCN重组人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白 Protein

CGB5 Protein Human 重组人 CGB5 蛋白

CD34 Protein Human 重组人 CD34 蛋白

PEPT1 (Peptide-transporters 1 0.5mgPEPT1 (Peptide-transporters 1) 肠道肽转运蛋白(小肽转运蛋白)多肽

CGB5 Protein Human 重组人 CGB5 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CD34 Protein Human 重组人 CD34 蛋白

DCN重组人 Decorin / DCN / SLRR1B 蛋白 Protein

小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human melatonin sulfate (MS) ELISA Kit 人褪黑色素(MS)检测试剂盒

HumanLipoarabinomannan,LAMELISAKit 人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickeni-iodothyronine,T3检测试剂盒鸡三甲状腺原(T3)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞TNFALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseEsiol,E3ELISAKit小鼠雌三醇(E3)检测试剂盒规格：96T/48T

人结肠癌组织源细胞小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠糖皮质类固醇受体(GR)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流


。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。