實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人角膜基質分離自眼角膜組織 ；角膜位於眼球前壁的一層透明膜 ，約占纖維膜的前1/6 ，從後麵看角膜呈正圓形 ，從前麵看為橫橢圓形 。角膜厚度各部分不盡相同 ，中央部薄 。角膜有十分敏感的神經末梢 ，如有外物接觸角膜 ，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛 。為了保持透明 ，角膜並沒有血管 ，透過外界空氣 、淚液及房水獲取養份及氧氣 。角膜分為五層 ，由前向後依次為 ：上皮細胞層 、前彈力層 、基質層 、後彈力層 、內皮細胞層 。角膜基質層是角膜的主要組成部分 ，占據角膜厚度的90% ，由角膜基質細胞 、膠原纖維和細胞外基質構成 。角膜基質層缺損的修複主要由角膜基質細胞的增殖及分泌細胞外基質完成 。角膜基質層具有結構規整 ，透明度高的特點 ，正常情況下角膜基質細胞分泌組成基質層的成分 ，維持角膜的透明度 ，此細胞對於角膜損傷的修複具有重要意義 。角膜基質細胞 ，存在於角膜基質層中 ，在正常情況下 ，處於靜止狀態 。但當角膜損傷時 ，不同上皮來源的因子及環境信號 ，將影響角膜基質細胞的應答反應 ，決定著角膜能否被修複 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人角膜基質采用膠原酶消化後組織貼塊法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人角膜基質經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠生長調節致癌基因α(GROα/CXCL1/MGSA)檢測試劑盒  ，英文名 ： GROα/CXCL1/MGSA ELISA Kit

Neuroophic factor mouse glial cell line derived (GDNF) ELISA Kit 小鼠膠質細胞係來源的神經營養因子(GDNF)檢測試劑盒

MouseRetinol-bindingprotein4,RBP-4ELISAKit 小鼠結合蛋白4(RBP-4)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanPeosidineELISAKit人戊糖素

同位素[γ32P]ATP激酶標記GST融合蛋白篩選試劑盒10次

ELISAKitx大鼠硫氧化還原蛋白

HA重組甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

RNF148(Ring finger protein 148 0.5mgRNF148(Ring finger protein 148) 環指蛋白148抗原

TNFRSF10D重組人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 Protein

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽)

IFNB1 Protein Human 重組人 Interferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標簽)

RNF148(Ring finger protein 148 0.5mgRNF148(Ring finger protein 148) 環指蛋白148抗原

CGB5 Protein Human 重組人 CGB5 蛋白 (Fc 標簽)

HA重組甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

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TNFRSF10D重組人 TRAIL R4 / CD264 / TNFRSF10D 蛋白 Protein

小鼠特異生長因子/相關因子(TSGF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai mitochondrial aibody (AMA) ELISA Kit 人抗線粒體抗體(AMA)檢測試劑盒

Humanproteindisulfideisomerase,PDIELISAKit 人蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA-IgA(Humanai-cardiolipinaibodyIgA)ELISAKit人抗心0脂抗體IgA

液相法去內毒素試劑盒20次

Mouseosteonectin,ONELISAKit小鼠骨粘連蛋白(ON)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人角膜基質細胞小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T