細胞簡介 ：

人滑膜分離自滑膜組織 ；滑膜組織是位於關節腔內麵的內襯結構 ，各種關節內疾病均會累及滑膜 。而滑膜細胞是維持關節正常功能的重要組織結構 ，同時在各種關節疾患中也是主要病變部位 。骨關節炎（OA）以關節軟骨退行性變為特征 ，其病理改變累及關節的各個組成部分 ，但絕不僅局限於軟骨 ，還包括軟骨下骨 、滑膜 、半月板和韌帶 。各組成部分的病理改變相互影響 ，相互作用 ，共同加速關節的退變 。滑膜細胞是構成滑膜層的大細胞群體 ，是維持關節正常功能的重要組織結構 ，它包埋在顆粒狀無定性的基質中 ，基質內有分散的纖維分布 。滑膜由A型（巨噬樣滑膜細胞） 、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成 。滑膜細胞主要功能 ：①滑膜細胞產生潤滑液成分 ，並且與關節腔的吸收和血液/潤滑液交換有關 ；②滑膜細胞增生 ，表現為不依賴於支持物生長 ，並且分泌大量的效應分子來促進炎症和關節損壞 ；③是自身自分泌和旁分泌網絡中效應因子的一部分 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人滑膜采用混合酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人滑膜經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠免疫球蛋白樣EGF樣域酪酸激酶1(Tie1)檢測試劑盒  ，英文名 ： Tie1 ELISA Kit

Mouse insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 小鼠胰島素受體β(ISR-β)檢測試劑盒

RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 大鼠(Cyt-C)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGFAP(Humanglialfibrillaryacidicprotein)ELISAKit人神經膠質纖維酸性蛋白

細胞甘油激酶(Glycerolkinase)活性酶連續反應比色法定量檢測試劑盒20次

RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit大鼠可溶性CD40配體(sCD40L)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

EFNB1重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

APP695-770 (Amyloid protein precursor 0.5mgAPP695-770 (Amyloid protein precursor) 澱粉樣肽前體蛋白(多肽抗原)

MS4A1重組人 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 標簽) Protein

ERN1 Protein Human 重組人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 標簽)

CNTN3 Protein Rat 重組大鼠 Contactin 3 / CNTN3 蛋白

白介素1α(IL1α)重組蛋白 Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)

ERN1 Protein Human 重組人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 標簽)

SMPD1重組小鼠 SMPD1 / ASM 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 標簽)

CPNE1重組人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 Protein

小鼠壞死因子相關凋亡誘導配體3(AIL-R3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 人抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)檢測試劑盒

Humandopachrometaomerase,DTELISAKit 人多巴色素異構酶(DT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA(Mouseai-cenolandcenosomeaibody)ELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體

一步法膠回收試劑盒20次

MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit小鼠孤腓肽(OFQ/N)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人滑膜細胞小鼠白介素 -18 (mouse IL-18)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 Biosesource

小鼠白細胞抑製因子 (mouse LIF)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   美國 R&D

小鼠淋巴細胞趨化因子 (mouse Lymphotactin)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T  

小鼠單核細胞趨化蛋白 -1 (mouse MCP-1)   作用 ：   ELISA   規格 ：   96T   奧地利 Bender

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。