老哥俱乐部

细胞简介：

人滑膜分离自滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构，各种关节内疾病均会累及滑膜

。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位

。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征
，其病理改变累及关节的各个组成部分
，但绝不仅局限于软骨，还包括软骨下骨
、滑膜
、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响，相互作用，共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的大细胞群体，是维持关节正常功能的重要组织结构，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤维分布。滑膜由A型（巨噬样滑膜细胞）
、B型（成纤维样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。滑膜细胞主要功能
：①滑膜细胞产生润滑液成分，并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关；②滑膜细胞增生，表现为不依赖于支持物生长
，并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏；③是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分
。

方法简介：

公司实验室分离的人滑膜采用混合酶消化法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人滑膜经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min

，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠免疫球蛋白样EGF样域酪酸激酶1(Tie1)检测试剂盒 
，英文名

： Tie1 ELISA Kit

Mouse insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 小鼠胰岛素受体β(ISR-β)检测试剂盒

RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 大鼠(Cyt-C)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGFAP(Humanglialfibrillaryacidicprotein)ELISAKit人神经胶质纤维酸性蛋白

细胞甘油激酶(Glycerolkinase)活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒20次

RatSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)检测试剂盒规格
：96T/48T

EFNB1重组小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 Protein

APP695-770 (Amyloid protein precursor 0.5mgAPP695-770 (Amyloid protein precursor) 淀粉样肽前体蛋白(多肽抗原)

MS4A1重组人 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 标签) Protein

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)

CNTN3 Protein Rat 重组大鼠 Contactin 3 / CNTN3 蛋白

白介素1α(IL1α)重组蛋白 Recombinant Interleukin 1 Alpha (IL1a)

ERN1 Protein Human 重组人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977, His & GST 标签)

SMPD1重组小鼠 SMPD1 / ASM 蛋白 Protein

IFNAR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 蛋白 (Fc 标签)

CPNE1重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 Protein

小鼠坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai cardiolipin aibody IgA (ACA-IgA) ELISA Kit 人抗心0脂抗体IgA(ACA-IgA)检测试剂盒

Humandopachrometaomerase,DTELISAKit 人多巴色素异构酶(DT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA(Mouseai-cenolandcenosomeaibody)ELISAKit小鼠抗中性粒/中心体抗体

一步法胶回收试剂盒20次

MouseorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit小鼠孤腓肽(OFQ/N)检测试剂盒规格：96T/48T

人滑膜细胞小鼠白介素 -18 (mouse IL-18)   作用
：   ELISA   规格：   96T   美国 Biosesource

小鼠白细胞抑制因子 (mouse LIF)   作用

：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠淋巴细胞趋化因子 (mouse Lymphotactin)   作用：   ELISA   规格
：   96T  

小鼠单核细胞趋化蛋白 -1 (mouse MCP-1)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。