實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人滑膜成纖維分離自滑膜組織 ；滑膜組織是位於關節腔內麵的內襯結構，各種關節內疾病均會累及滑膜 。而滑膜細胞是維持關節正常功能的重要組織結構 ，同時在各種關節疾患中也是主要病變部位 。骨關節炎（OA）以關節軟骨退行性變為特征 ，其病理改變累及關節的各個組成部分 ，但絕不僅局限於軟骨 ，還包括軟骨下骨 、滑膜 、半月板和韌帶 。各組成部分的病理改變相互影響 ，相互作用 ，共同加速關節的退變 。滑膜細胞是構成滑膜層的大細胞群體 ，是維持關節正常功能的重要組織結構 ，它包埋在顆粒狀無定性的基質中 ，基質內有分散的纖維分布 。滑膜由A型（巨噬樣滑膜細胞） 、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人滑膜成纖維采用混合酶消化結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人滑膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次 ；

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠抑製素B(INHB)檢測試劑盒  ，英文名 ： INHB ELISA Kit

Mouse immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒

MouseP-SelectinELISAkit 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanDiphtheriaaibodyELISAKit人白喉抗體

細胞Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsmActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa)

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

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VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

小鼠核因子κB抑製蛋白α(IKB-α)檢測試劑盒 96T/48T

Rat ovarian cancer marker-CA125 CA125 ELISA Kit 大鼠卵巢癌標誌物CA125 檢測試劑盒

humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISAKIT 人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-Nogo-Aaibody,NOGO-AAb檢測試劑盒人NOGO-A抗體(Nogo-AAb)檢測試劑盒規格：96T/48T

植物酸性0酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次

HumanUlaSensitivegrowthhormone,US-GHELISAKit人超敏生長激素(US-GH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人滑膜成纖維細胞小鼠β連環蛋白/聯蛋白(β-Cat)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨退化特異標誌物(CTX-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠垂體腺苷酸環化酶激活肽(PACAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

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