老哥俱乐部

细胞简介：

人骨髓树突状分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体

，包括细菌
、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨
、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中
，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色
，称为红骨髓。出生时
，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大
，脂肪细胞增多
，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓DC细胞是由骨髓单核细胞诱导而成的
；树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落
，细胞大而形态不规则，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突
，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡
，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样
。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成，多数呈悬浮生长
， 细胞呈圆形，细胞体积进一步增大，表面大量粗细不等的树枝样突起(高倍镜或者电镜下可观察到 )
，伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟
。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志，主要通过形态学
、组合性细胞表面标志
、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，进而激活T淋巴细胞，诱导免疫应答

，处于启动、调控
、并维持免疫应答的中心环节；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答，不能激活T细胞的信号
，可导致T细胞无能，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受
。未成熟树突状细胞表面CD80
、CD86
、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下。

方法简介：

实验室分离的人骨髓未成熟DC采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞
、培养过程添加细胞因子诱导而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人骨髓树突状(未成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定、细 胞 形态等综合鉴定，纯度可达80%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形
、梭形
、多角形
，形态多样

传代特性：属于高度分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

人骨髓树突状(未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

猪红细胞生成素(EPO)ELISA 试剂盒

One pit protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)检测试剂盒

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit 猪髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

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小鼠脱氢表雄酮(DHEA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human heparan sulfate proteoglycan (HSPG) ELISA Kit 人肝素糖蛋白(HSPG)检测试剂盒

Humansupperaigen,SagELISAKit 人超抗原(Sag)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenPlateletFactor4,PF-4检测试剂盒鸡血小板因子4(PF-4/CXCL4)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞PAR-2蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit小鼠FMS样酪激酶3(Flt3)检测试剂盒规格
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人骨髓树突状细胞(未成熟DC细胞)小鼠脱氧酚检测试剂盒   小鼠脱氧酚试剂盒   规格型号
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，来源：检测试剂盒（进口分装）
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：小鼠脱氧酚试剂盒
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：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠粘蛋白检测试剂盒   小鼠粘蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠粘蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠粘蛋白试剂盒、小鼠粘蛋白eisa试剂盒   保存条件
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小鼠β葡糖苷酶检测试剂盒   小鼠β葡糖苷酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠β葡糖苷酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠β葡糖苷酶试剂盒、小鼠β葡糖苷酶eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠β葡萄糖酸苷酶检测试剂盒   小鼠β葡萄糖酸苷酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠β葡萄糖酸苷酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠β葡萄糖酸苷酶试剂盒、小鼠β葡萄糖酸苷酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。