細胞簡介 ：

人骨骼肌分離自四肢肌肉組織 ；骨骼肌又稱橫紋肌 ，肌肉中的一種 ，約占全身重量的40% 。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞 ，肌膜的外麵有基膜緊密貼附 。屬於橫紋肌 ，橫紋肌還包括心肌與內髒橫紋肌 ，其中骨骼肌主要分布於四肢 。每塊肌肉都是具有一定形態 、結構和功能的器官 ，有豐富的血管 、淋巴分布 ，在軀體神經支配下收縮或舒張 ，進行隨意運動 。肌肉可根據共形狀 、大小 、位置 、起止點 、纖維方向和作用等命名 。依形態命名的如斜方肌 、菱形肌 、三角肌 、梨狀肌等 。骨骼肌細胞呈纖維狀 ，不分支 ，有明顯橫紋 ，核很多 ，且都位於細胞膜下方 。肌細胞內有許多沿細胞長軸平行排列的細絲狀肌原纖維 。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶） 。明帶染色較淺 ，而暗帶染色較深 。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線 。H線的中部有一M線 。明帶中間 ，有一條較暗的線稱為Z線 。兩個Z線之間的區段 ，叫做一個肌節 。骨骼肌細胞也稱橫紋肌細胞 ，細胞呈纖維狀 ，不分支 ，有明顯橫紋 ，核很多 ，且都位於細胞膜下方 ，細胞多呈梭行 ，具有一定的方向性 。骨骼肌細胞原代分離培養3天後 ，可見細胞貼壁伸展 ，細胞形態大小不一 ，呈梭形 、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形 、居中 ；2周後細胞匯合 ，多數細胞伸展呈長梭形 ，胞漿豐富 ，有分枝狀突起 ，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長 ，高低起伏 ；細胞密度低時 ，常交織成網狀 ；密度高時 ，則排列為旋渦狀或柵欄狀 。傳代後細胞生長較快 ，4-6天即可匯合 ，並保持上述形態學特征和生長特點 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人骨骼肌采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人骨骼肌經α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃ ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠6前列腺素(6-K-PG)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠5羥色胺(5-HT)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠5核苷酸酶(5-)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅳ型膠原(ColⅣ)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠肝病毒抗體(HV-Ab)試劑盒

Human decay accelerating factor (DAF/CD55) ELISA Kit 人衰變加速因子(DAF/CD55)試劑盒

Humaissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)試劑盒 進口分裝

HumanAi-titinAibody,TTN試劑盒人抗肌聯蛋白抗體(TTN)試劑盒

植物氧化型(GSSG)濃度熒光定量試劑盒50次

Humanansforminggrowthfactorα ，TGF-αELISAKit人轉化生長因子α(TGF-α)試劑盒

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

ADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與1型-7抗原

WWP2重組人 WWP2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標簽)

EPCAM Protein Rat 重組大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (His 標簽)

促腎上皮質激素釋放激素(CRH)重組蛋白 Recombinant Corticotropin Releasing Hormone (CRH)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標簽)

MAPK1重組小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

TNFRSF14 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白

GUCA1A重組人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 Protein

人骨骼肌細胞大鼠血管細胞粘附分子1(VCAM1)試劑盒  ，英文名 ： VCAM1 ELISA Kit

Mouse Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)試劑盒

Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAkit 小鼠基質金屬蛋白酶抑製因子2(TIMP-2)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空腸彎曲菌黏附蛋白

細胞CSF1R激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitDA大鼠多巴胺

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。