老哥俱乐部

细胞简介：

人骨骼肌分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种
，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附
。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管
、淋巴分布
，在躯体神经支配下收缩或舒张
，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点
、纤维方向和作用等命名
。依形态命名的如斜方肌
、菱形肌
、三角肌
、梨状肌等
。骨骼肌细胞呈纤维状
，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深
。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞
，细胞呈纤维状
，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展
，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形
、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富
，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时
，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点
。

方法简介：

公司实验室分离的人骨骼肌采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人骨骼肌经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

实验报告：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠6前列腺素(6-K-PG)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠5羟色胺(5-HT)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠5核苷酸酶(5-)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠Ⅳ型胶原(ColⅣ)试剂盒     试剂盒   组装/原装

小鼠肝病毒抗体(HV-Ab)试剂盒

Human decay accelerating factor (DAF/CD55) ELISA Kit 人衰变加速因子(DAF/CD55)试剂盒

Humaissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)试剂盒 进口分装

HumanAi-titinAibody,TTN试剂盒人抗肌联蛋白抗体(TTN)试剂盒

植物氧化型(GSSG)浓度荧光定量试剂盒50次

Humanansforminggrowthfactorα
，TGF-αELISAKit人转化生长因子α(TGF-α)试剂盒

FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated Protein

ADAMTS7 peptide 整合素样金属蛋白酶与1型-7抗原 0.5mgADAMTS7 peptide 整合素样金属蛋白酶与1型-7抗原

WWP2重组人 WWP2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签)

EPCAM Protein Rat 重组大鼠 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (His 标签)

促肾上皮质激素释放激素(CRH)重组蛋白 Recombinant Corticotropin Releasing Hormone (CRH)

FCGR2A Protein Human 重组人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 标签)

MAPK1重组小鼠 ERK2 / MAPK1 / MAPK2 蛋白 (His & GST 标签) Protein

TNFRSF14 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 HVEM / TNFRSF14 蛋白

GUCA1A重组人 GCAP1 / GUCA1A 蛋白 Protein

人骨骼肌细胞大鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)试剂盒
，英文名： VCAM1 ELISA Kit

Mouse Glucose depende insulinoopic polypeptide (GIP) ELISA Kit 小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)试剂盒

Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase2,TIMP-2ELISAkit 小鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空肠弯曲菌黏附蛋白

细胞CSF1R激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitDA大鼠多巴胺

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。