老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人肝实质分离自肝脏组织；肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖
、分泌性蛋白质的合成等作用；肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里大的器官，位于机体中的腹部位置，在右侧横隔膜之下
，位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方

，胃的上方。肝脏是机体消化系统中大的消化腺，为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官，又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构：肝脏位于右上腹
，隐藏在右侧膈下和肋骨深面
，大部分肝为肋弓所复盖，仅在腹上区
、右肋弓间露出并直接接触腹前壁，肝上面则与膈及腹前壁相接

。肝实质细胞是指具有肝功能的单位
，是肝脏的基本组成单位之一。肝实质细胞与主要病生理变化
：急性肝炎
、肝硬化
、肝脓肿。肝实质细胞属于中高度分化细胞，生长营养需求高
，在体外存活时间短
；细胞呈圆形或多角形，核大而圆
，居中，常染色质丰富
，部分有双核或多倍体核
。肝脏作为体内重要的器官，在整个物质代谢过程中具有广泛而多样的作用。

方法简介：

公司实验室分离的人肝实质采用混合酶灌流消化、反复低速离心制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人肝实质经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

兔子免疫球蛋白G试剂盒   兔子免疫球蛋白G试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子免疫球蛋白G试剂盒，规格型号：96T/48T
，来源

：试剂盒（进口分装），产品别名：兔子免疫球蛋白G试剂盒、兔子免疫球蛋白G 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月
。

兔子免疫球蛋白E试剂盒   兔子免疫球蛋白E试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子免疫球蛋白E试剂盒，规格型号
：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：兔子免疫球蛋白E试剂盒
、兔子免疫球蛋白E 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

兔子免疫球蛋白A试剂盒   兔子免疫球蛋白A试剂盒   规格型号
：96T/48T   兔子免疫球蛋白A试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）

，产品别名：兔子免疫球蛋白A试剂盒、兔子免疫球蛋白A 试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

兔子可溶性CD40配体试剂盒   兔子可溶性CD40配体试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子可溶性CD40配体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：兔子可溶性CD40配体试剂盒
、兔子可溶性CD40配体试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠白介素35(IL-35)试剂盒 96T/48T

Rat heat shock factor 1 (HSF1) ELISA Kit 大鼠热休克因子1(HSF1)试剂盒

Humayrosinekinase2,Tyk-2ELISAKit 人酪激酶2(Tyk-2)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCalretinin,CR试剂盒人钙结合蛋白(CR)试剂盒规格：96T/48T

重组逆转录病毒稳态表达细胞克隆冻存试剂盒50次

Humansolubleierleukin-1receptorⅠ，IL-1sRⅠELISAKit人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)试剂盒规格：96T/48T

SDF2重组人 SDF2 蛋白 Protein

血小板生成素(TPO)重组蛋白 Recombinant Thrombopoietin (TPO)

HA重组甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

GFPT1 Protein Human 重组人 GFPT1 / GFAT 蛋白

B18R Protein Vaccinia Virus 重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白

血小板生成素(TPO)重组蛋白 Recombinant Thrombopoietin (TPO)

GFPT1 Protein Human 重组人 GFPT1 / GFAT 蛋白

SDF2重组人 SDF2 蛋白 Protein

B18R Protein Vaccinia Virus 重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白

HA重组甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

人肝实质细胞大鼠血小板激活因子(PAF)试剂盒 ，英文名： PAF ELISA Kit

Mouse calf iestinal alkaline phosphatase (CIAP) ELISA Kit 小鼠牛小肠碱性0酸酶(CIAP)试剂盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISAkit 小鼠血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumancoagulationfactorII,FIIELISAKit人Ⅱ

细胞CDK6/CYCD1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitCAM大鼠钙调素