細胞簡介 ：

人肺大動脈內皮分離自肺大動脈組織 ；肺大動脈亦稱肺動脈幹 。在呼吸空氣的脊椎動物中 ，把靜脈血由心髒導向肺髒的動脈 。肺大動脈起於右心室 ，在主動脈之前向左上後方斜行 ，在主動脈弓下方分為左 、右肺動脈 ，經肺門入肺 。肺動脈幹位於心包內 ，為一粗短的動脈幹 。起自右心室 ，在升主動脈前方向左後上方斜行 ，至主動脈弓下方分為左 、右肺動脈 。左肺動脈較短 ，在左主支氣管前方橫行 ，分二支進入左肺上 、下葉 。右肺動脈較長而粗 ，經升主動脈和上腔靜脈後方向右橫行 ，至右肺門處分為三支進入右肺上 、中 、下葉 。細胞呈單層多角形鋪路石狀分布 ；該細胞在維持血管內外的動態平衡 、合成和分泌細胞因子和介質 、維持凝血和纖溶的動態平衡中起重要作用 。肺大動脈內皮細胞呈單層多角形鋪路石狀分布 ，該細胞在維持血管內外的動態平衡 、合成和分泌細胞因子和介質 、維持凝血和纖溶的動態平衡中起重要作用 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人肺大動脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人肺大動脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒

People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脫氧尿三0酸(DP)檢測試劑盒

HumanCalcitonin,CTELISAKit 人降鈣素(CT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancarcinoembryonicaign,CEA檢測試劑盒人癌胚抗原(CEA/CD66)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

重組腺病毒效價比色法定量檢測試劑盒50次

HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

EGFR重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

腦源性神經營養因子(BDNF)重組蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

GABARAP重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標簽) Protein

CDK4 Protein Human 重組人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 標簽)

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

腦源性神經營養因子(BDNF)重組蛋白 Recombinant Brain Derived Neurotrophic Factor (BDNF)

CDK4 Protein Human 重組人 CDK4 / CMM3 蛋白 (GST 標簽)

EGFR重組人 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 Protein

NA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神經酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

GABARAP重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標簽) Protein

小鼠胃腸癌標誌物CA199ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor II (BMPR- II) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)檢測試劑盒

Humanornithinecarbamoylansferase,OCTELISAKit 人鳥氨基甲酰轉移酶(OCT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerleukin3,IL-3檢測試劑盒雞白介素3(IL-3)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞IGF蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人肺大動脈內皮細胞小鼠細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子/CD147   英文名稱 ：   mouse Exacellular Maix Metalloproteinase Inducer /CD147   規格 ：      英文縮寫 ：   EMMPRIN/CD147

小鼠抗可提取核抗原抗體ENA抗體   英文名稱 ：   Mouse Exactable Nuclear Aibody   規格 ：      英文縮寫 ：   ENA

小鼠β內啡肽   英文名稱 ：   Beta-Endorphin   規格 ：      英文縮寫 ：   β-EP

小鼠表皮生長因子   英文名稱 ：   epidermal growth factor-like growth factor   規格 ：      英文縮寫 ：   EGF

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。