實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

人表皮角質形成分離自皮膚組織 ；表皮位於動物皮膚的外層 ，由胚胎時期外胚層形成 ，具有抗摩擦和抗損傷的作用 。表皮是皮膚的淺層結構 ，由複層扁平上皮構成 。從基底層到表麵可分為五層 ，即基底層 、棘層 、顆粒層 、透明層和角質層 。表皮角質形成細胞是一種能合成角質蛋白的上皮細胞 ，此類細胞為表皮的主體 ，由表皮深層始逐漸增殖 、分化 ，並在成為角化的角質細胞中，細胞核與細胞器消失 ，細胞亦失去生理功能而脫落 。未脫落部分對機體尚有保護作用 ，故不必在洗擦身體時用力搓擦 ，使其過早脫失 。表皮角質形成細胞主要分布於表皮基底層 ，在上皮程序性死亡後 ，細胞產生角化並移向表皮 。體外培養的表皮角化細胞容易導致終末分化 ，不能充分增殖 。角質形成細胞終產生角質蛋白 ，在其向角質細胞演變過程中 ，一般可以分為四層 ，即基底層 、棘層 、顆粒層以及角質層 。有人把前三層或前二層稱為生發層或馬爾匹基層 。此外 ，在某些部位 ，特別在掌蹠部位 ，角質層下方還可見到透明層 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的人表皮角質形成層先消化 、後-膠原酶混合消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的人表皮角質形成經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品：

小鼠內皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 試劑盒

People of coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 人皮質酮/腎上腺酮(CO)檢測試劑盒

HumanAcylationStimulatingProtein,ASPELISAKit 人酰化刺激蛋白(ASP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human8-isoprostaglandin,8-iso-PG檢測試劑盒人8異前列腺素(8-iso-PG)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

正常大鼠(SpragueDawley)腎組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-IgEreceptoraibodyELISAKit小鼠抗IgE受體抗體檢測試劑盒規格 ：96T/48T

IL22RA1重組狗 IL22RA1 / IL22R 蛋白 Protein

NGN3(neurogenin 3; Neurog3 0.5mgNGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神經元素3抗原

ADRBK1重組人 GRK2 / ADRBK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDH2 Protein Human 重組人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 蛋白 (His & Fc 標簽)

FABP4 Protein Mouse 重組小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP / AFABP 蛋白

NGN3(neurogenin 3; Neurog3 0.5mgNGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神經元素3抗原

CDH2 Protein Human 重組人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 蛋白 (His & Fc 標簽)

IL22RA1重組狗 IL22RA1 / IL22R 蛋白 Protein

FABP4 Protein Mouse 重組小鼠 FABP4 / ALBP / A-FABP / AFABP 蛋白

ADRBK1重組人 GRK2 / ADRBK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human phosphorylated exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 人0酸化細胞外信號調節激酶(pERK)檢測試劑盒

HumanPancreaticLipase,PLELISAKit 人胰脂肪酶(PL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerferonα,IFN-α檢測試劑盒雞α幹擾素(IFN-α)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞DHPR受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

人表皮角質形成細胞小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠腺病毒（ADV）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠纖維蛋白肽B（FPB）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠纖溶抑製因子/激活的纖溶抑製物(TAFI)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝