老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠毛囊干分离自皮肤毛囊组织
；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头
，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上
，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈
，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔
。毛囊位于真皮和皮下组织中
，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织。毛囊干细胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一种细胞
。毛囊干细胞属于成体干细胞
，在体内处于静止状态
，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现
，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程

。毛囊干细胞和其它成体干细胞一样

，具有慢周期性、未分化性


、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞（hair follicle stem cells，FSC）、短暂增殖细胞（transit amplifying cells，TAC）有丝分裂后分化细胞（postmitotic differentiating cells，PDC）三个阶段。毛囊干细胞在光镜下呈立方形
，细胞体积小，核浆比率大，表面光滑，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛

，细胞核存在许多卷曲
，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性。

方法简介

：

实验室分离的大鼠毛囊干采用胶原酶 - 联合消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠毛囊干经CD34免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基

：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性

：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件
：气相
：空气，95%
；CO2，5%

大鼠毛囊干体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养

，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 

，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

山羊坏死因子α试剂盒   山羊坏死因子α试剂盒   规格型号
：96T/48T   山羊坏死因子α试剂盒
，规格型号：96T/48T
，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：山羊坏死因子α试剂盒、山羊坏死因子α 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

山羊生长激素释放多肽试剂盒   山羊生长激素释放多肽试剂盒   规格型号：96T/48T   山羊生长激素释放多肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名
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。

山羊白介素4试剂盒   山羊白介素4试剂盒   规格型号：96T/48T   山羊白介素4试剂盒
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山羊白介素10试剂盒   山羊白介素10试剂盒   规格型号：96T/48T   山羊白介素10试剂盒

，规格型号：96T/48T
，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名

：山羊白介素10试剂盒
、山羊白介素10 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期

：6个月。

豚鼠内皮型合酶(NOS3)试剂盒 
，英文名： NOS3 ELISA Kit

Human replication protein A (RPA-70) ELISA Kit 人复制蛋白A(RPA-70)试剂盒

Rabbitsolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 兔子可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBAX(RabbitBcl-2AssaciatedXprotein)ELISAKit兔Bcl-2相关X蛋白

线虫β-半乳糖苷酶比色法定量试剂盒20次

rabbitCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit兔子Ⅰ型胶原(ColⅠ)试剂盒规格：96T/48T

CXCL13重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 Protein

Morphine/BSA 与牛血清白蛋白偶联物 10mgMorphine/BSA 与牛血清白蛋白偶联物

DAPK3重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签) Protein

IL17A Protein Human 重组人 IL17 / IL17A 蛋白

PREP Protein Mouse 重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白

Morphine/BSA 与牛血清白蛋白偶联物 10mgMorphine/BSA 与牛血清白蛋白偶联物

IL17A Protein Human 重组人 IL17 / IL17A 蛋白

CXCL13重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 Protein

PREP Protein Mouse 重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白

DAPK3重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签) Protein

大鼠毛囊干细胞豚鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)试剂盒 ，英文名

： ACTH ELISA Kit

Many people immunoglobulin receptor (poly-IgR) ELISA Kit 人多免疫球蛋白受体(poly-IgR)试剂盒

rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-HexA(MouseBeta-hexosaminidaseA)ELISAKit小鼠β氨基己糖苷酶A

细菌细胞色素氧化酶活性比色法定量试剂盒20次

rabbitHyaluronicacid,HAELISAKit兔子透明质酸(HA)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书


，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。