老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠卵巢颗粒分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同
，仅左侧发育（右侧已退化）
，呈葡萄状
，均为处于不同发育时期的卵泡
，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关
。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构
，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织

，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成
；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成
，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动
、发育、排卵、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。卵巢颗粒细胞是卵泡内的大细胞群，也是主要的功能细胞
，卵泡发育的显著标志之一就是颗粒细胞迅速生长及增殖，而成年动物的卵泡闭锁主要是由颗粒细胞凋亡引起
，尤其在卵泡发育后期，此外
，颗粒细胞还与卵泡膜细胞共同完成卵巢激素的合成，维持着有利于卵母细胞生长和成熟的微环境
。细胞形状呈圆形或椭圆形

。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠卵巢颗粒采用先机械分离
，而后胶原酶消化，后差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠卵巢颗粒经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV
、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

山羊β内啡肽(β-EP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

内皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠脑源性神经营养因子(BDNF)试剂盒 ，英文名
： BDNF ELISA Kit

Human paraneoplastic pemphigus aibody (PNP) ELISA Kit 人副性天疱疮抗体(PNP)试剂盒

rabbitImmunoglobulinE,IgEELISAKit 兔子免疫球蛋白E(IgE)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBALPELISAKit大鼠骨碱性0酸酶

线虫β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒50次

Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit兔子酯转移蛋白(CETP)试剂盒规格：96T/48T

IL1RAPL1重组人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

抑制素βE(INHβE)重组蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

HA重组甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 标签)

GFP Protein Aequorea victoria 重组水母 GFP 蛋白

抑制素βE(INHβE)重组蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

IL17RA Protein Human 重组人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 标签)

IL1RAPL1重组人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

GFP Protein Aequorea victoria 重组水母 GFP 蛋白

HA重组甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

大鼠卵巢颗粒细胞豚鼠肿瘤坏死因子α(TNFα)试剂盒 
，英文名
： TNFα ELISA Kit

Lung resistance protein (LRP) ELISA Kit 人肺耐药蛋白(LRP)试剂盒

rabbitmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit 兔子基质金属蛋白酶5(MMP-5)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBCR(HumanBcellreceptor)ELISAKit人B细胞受体

仙客来培养基500毫升溶液/片剂

rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit兔子C反应蛋白(CRP)试剂盒规格：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。