老哥俱乐部

细胞简介

：

大鼠角膜成纤维分离自眼角膜组织
；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形
，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同
，中央部最薄
。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜
，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气
。角膜分为五层，由前向后依次为
：上皮细胞层、前弹力层
、基质层
、后弹力层、内皮细胞层

。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大
，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括
：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织
。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠角膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠角膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠锚定蛋白重复域蛋白1(ANKRD1)检测试剂盒

，英文名
： ANKRD1 ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor binding protein 1 (IGFBP-1) ELISA Kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)检测试剂盒

Rathypoxia-induciblefactor1α,HIF-1αELISAKit 大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGEF(HumanGuanineExchangeFactor)ELISAKit人鸟苷酸交换因子

细胞甘油三酯(iglyceride)含量酶连续循环反应比色法定量检测试剂盒20次

RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit大鼠横纹肌辅肌动蛋白α(smActinin-α)检测试剂盒规格
：96T/48T

COLEC12重组食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

Integrin alpha V 巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽 0.5mgIntegrin alpha V 巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽

CST1重组人 Cystatin SN / CST1 蛋白 Protein

ESD Protein Human 重组人 Esterase D / ESD 蛋白

CD55 Protein Mouse 重组小鼠 CD55 / DAF 蛋白

Integrin alpha V 巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽 0.5mgIntegrin alpha V 巨噬细胞来源的趋化因子αV多肽

ESD Protein Human 重组人 Esterase D / ESD 蛋白

COLEC12重组食蟹猴 CLP1 / COLEC12 蛋白 Protein

CD55 Protein Mouse 重组小鼠 CD55 / DAF 蛋白

CST1重组人 Cystatin SN / CST1 蛋白 Protein

小鼠坏死因子β(TNF-β)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai thymocyte globulin (ATG) ELISA Kit 人抗细胞球蛋白(ATG)检测试剂盒

HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit 人分泌型0脂酶A2(sPLA2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAC-1(Humanadenylylcyclase1)ELISAKit人腺苷酸环化酶1

(NO)终点比色法定量检测试剂盒100次

MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit小鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠角膜成纤维细胞小鼠癌标志物-CA153检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠瘤病毒18（HPV-18）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠瘤病毒16（HPV-16）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。