老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠脊髓成纤维分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护
；是源自脑的中枢神经系统延伸部分
。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息
。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分
，在椎管里面，上端连接延髓
，两旁发出成对的神经，分布到四肢
、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成
；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤
、肌肉和内脏器官
。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大

，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性

、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的脊髓成纤维细胞呈圆形、折光性良好
，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。脊髓成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脊髓成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脊髓成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠酯转移蛋白(CETP)检测试剂盒 ，英文名
： CETP ELISA Kit

Porcine oxidized low density lipoprotein (OxLDL) ELISA Kit 猪氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒

ELISA 小鼠激活素A(mouse Activin A)  进口分装

CLIAKitforLPA(HumanL-phenylalanine)ELISAKit人苯

通用型1毫升1厘米光径塑料比色皿1个

ELISAKitALV-AG鸡白血病病毒抗原

EGF重组狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein

ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原

IFNG重组人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

FSTL1 Protein Mouse 重组小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 标签)

ORX-A(orexin-A 0.5mgORX-A(orexin-A) 增食欲素-A/欲激素A抗原

CCL23 Protein Human 重组人 CCL23 / MIP 3 蛋白

EGF重组狗 EGF / Epidermal Growth Facto 蛋白 Protein

FSTL1 Protein Mouse 重组小鼠 FSTL1 蛋白 (Fc 标签)

IFNG重组人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 Protein

小鼠游离前列腺特异性抗原(fPSA)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai histone aibody (AHA) ELISA Kit 人抗组蛋白抗体(AHA)检测试剂盒

HumanNeurotensin,ELISAKit 人神经降压素()检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-iso-PGELISAKit大鼠8异前列腺素

异硫酸胍1公斤

Mousemonocytechemotacticprotein4,MCP-4ELISAKit小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠脊髓成纤维细胞血管内皮生长因子受体2   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   规格：      英文缩写
：   VEGF-R2

血管内皮生长因子受体3   英文名称
：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   规格：      英文缩写：   VEGF-R3

血管活性肠肽   英文名称
：   vasoactine inestinal peptide   规格：      英文缩写：   VIP

内脂素/内脏脂肪素   英文名称：   Visfatin   规格：      英文缩写：   Visfatin

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。