老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠呼吸道上皮分离自呼吸道；呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道，有肺脊椎动物的呼吸道分上、下两部：鼻

、咽和喉合称上呼吸道。气管及其以后一分再分的管道
，合称为下呼吸道，或称为气管树
。气管树是随着动物的进化逐渐复杂化的。整个呼吸道内表面都分布有分泌液和纤毛（鼻孔
、咽后壁和声带黏膜除外），它能温暖（或冷却）
、湿润和净化吸入的空气，对于呼吸器官和机体有着保护作用。呼吸道以骨或软骨做支架，其内表面覆盖着黏膜
，黏膜内分布着丰富的毛细血管。呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面，主要由柱状
，杯形，梭形和锥形等不同形状细胞组成
。看上去像复层上皮，但实际上所有细胞底部均附于基膜上

，属单层上皮，故称假复层柱状上皮，上皮表面有纤毛，杯状细胞可分泌粘液，包裹着大量细菌，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道
。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠呼吸道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠呼吸道上皮经pan-cytokeratin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠胆囊收缩素(CCK)检测试剂盒
，英文名： CCK ELISA Kit

Porcine platelet activating factor (PAF) ELISA Kit 猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒

ELISA 小鼠Active Caspase-7  进口分装

CLIAKitforLPLELISAKit大鼠脂蛋白脂酶

通用型1毫升1厘米光径玻璃比色皿1个

ELISAKitDEV鸡病毒性肠病毒

SERPINA11重组小鼠 SerpinA11 蛋白 Protein

cath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原 0.5mgcath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CCL21 Protein Human 重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白

cath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原 0.5mgcath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原

CCL21 Protein Human 重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

SERPINA11重组小鼠 SerpinA11 蛋白 Protein

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai ophoblast aibody (ATA) ELISA Kit 人抗滋养膜细胞抗体(ATA)检测试剂盒

Humanlambdaimmunoglobulinlightchain,λ-IgLCELISAKit 轻链lambda(λ-IgLC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-OHdGELISAKit大鼠8羟基脱氧鸟苷

乙酰酯酶活性抑制剂筛选比色法检测试剂盒20次

MouseMucin-7,MUC7ELISAKit小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠呼吸道上皮细胞血管生长素   英文名称：   Angiogenin   英文缩写：   ANG   规格：  

血管生成素-2   英文名称：   Angiopoietin-2   英文缩写：   ANG2   规格
：  

血管生成素相关生长因子   英文名称：   Angiopoietin Growth Factors   英文缩写：   AGF   规格：  

载脂蛋白P   英文名称：   Apolipoprotein P   英文缩写

：   ApoP   规格：

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基

、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态

，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。