老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小


；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠颌骨成纤维分离自颌骨组织；颌骨
，是指颌部的骨头

，分为上颌骨和下颌骨
。构成口腔上下部的骨头和肌肉组织，上部叫上颌，下部叫下颌
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显
。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠颌骨成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠颌骨成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气

，95%
；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)检测试剂盒 ，英文名： BMP-2 ELISA Kit

Porcine procollagen peptide (P III NP) ELISA Kit 猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)检测试剂盒

埃博拉病毒(EBOV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMIP-5(Humanmacrophageinflammatoryprotein5)ELISAKit人巨噬细胞性蛋白5

体液结构型内皮细胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitCD8犬白细胞分化抗原8

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

Rad51 Rad51抗原 0.5mgRad51 Rad51抗原

GFRA1重组人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 蛋白 Protein

CCL18 Protein Human 重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白 (Fc 标签)

Rad51 Rad51抗原 0.5mgRad51 Rad51抗原

CCL18 Protein Human 重组人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白

NA重组甲型流感 H1N1 神经酶 (Neuraminidase / NA) (H274Y mutation) (高活性) Protein

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白 (Fc 标签)

GFRA1重组人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 蛋白 Protein

小鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai neuophil aibody (ANA) ELISA Kit 人抗中性粒细胞抗体(ANA)检测试剂盒

Humacellreceptor,TCRELISAKit 人T细胞受体(TCR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforABeta1-40ELISAKit大鼠β淀粉样蛋白1-40

乙基十六烷基二甲基溴化胺(cetyldimethylethammoniumbromide)1公斤

Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAKit小鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCAIgG)检测试剂盒规格

：96T/48T

大鼠颌骨成纤维细胞血红素氧化酶 (HO-1)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

热休克蛋白 27(HSP27)   作用

：   ELISA   规格：      进口分装

热休克蛋白 70(HSP70)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

HA 丝酸肽酶 1 (Ha1)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装