老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠睾丸间质分离自睾丸组织；睾丸间质细胞成群分布在曲精小管之间，胞体呈圆形，椭圆形或不规则形，胞体较大
，直径约20μm，胞质呈嗜酸性，细胞核呈圆形或卵圆形
，常位于中央
，染色较淡，有1～2个核仁线粒体多，呈管嵴状，无分泌颗粒
。从青春期开始
，睾丸间质细胞受垂体前叶嗜碱性细胞分泌的间质细胞刺激素（黄体生成素）的作用，能合成分泌雄性激素，可促进的发生和男性生殖器官发育，以及维持性征和性功能。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠睾丸间质采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠睾丸间质经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

中文名称   方法   规格

小鼠25羟基D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISAKit   ELISA. 

小鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA. 

小鼠C(VC)ELISAKit   ELISA.

猪补体蛋白3(C3)ELISA 试剂盒

Human Legionella aigen (LP Ag) ELISA Kit 人军团菌抗原(LP Ag)试剂盒

PorcinecardiacoponinⅠ,cTn-ⅠELISAKit 猪心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)试剂盒 进口分装

CLIAKitforALG(Humanai-lymphocyteglobulin)ELISAKit人抗淋巴细胞球蛋白

血液卵0脂乙酰转移酶(LCAT)活性荧光定量试剂盒20次

MouseVitaminC,VCELISAKit小鼠C(VC)试剂盒

CNTN3重组人 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (708 Asp/Asn, His 标签) Protein

卵泡抑素(FS)重组蛋白 Recombinant Follistatin (FS)

SBDS重组人 SBDS / Shwachman-Bodian-Diamond syndrome 蛋白 (His 标签) Protein

ALDH1A1 Protein Human 重组人 ALDH1 / ALDH1A1 / ALDC 蛋白 (His 标签)

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

卵泡抑素(FS)重组蛋白 Recombinant Follistatin (FS)

ALDH1A1 Protein Human 重组人 ALDH1 / ALDH1A1 / ALDC 蛋白 (His 标签)

CNTN3重组人 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (708 Asp/Asn, His 标签) Protein

HA Protein H7N9 重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 标签)

SBDS重组人 SBDS / Shwachman-Bodian-Diamond syndrome 蛋白 (His 标签) Protein

大鼠睾丸间质细胞小鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA 试剂盒

Rat alternative macrophage activation associated chemical factor 1 (AmAC-1) ELISA Kit 大鼠巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)试剂盒

Humanai-matedciullinatedvimeinaibody,MCVELISAKit 人抗突变型瓜波形蛋白抗体(MCV)试剂盒 进口分装

HumanAlanineAminoansferase,ALT/GPT试剂盒人转氨酶/谷转氨酶(ALT/GPT)试剂盒

植物O-糖基糖蛋白化试剂盒5次

Mouse8-isoprostaglandin,8-iso-PGELISAKit小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)试剂盒