老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠腹膜间皮分离自腹膜组织；腹膜是存在于高等脊椎动物腹腔中的一层黏膜，主要由间皮细胞构成，藉由结缔组织的支持所形成的一层膜状组织。腹膜包覆大部分腹腔内的器官，能分泌黏液润湿脏器的表面，减轻脏器间的摩擦。腹腔脏器的血液、淋巴和神经组织经由腹膜与外界相连；腹膜也具有吸收撞击保护内脏的效果。腹膜（peritoneum）为全身面积最大、配布最复杂的浆膜，由皮及少量结缔组织构成
，薄而光滑，呈半透明状。衬于腹
、盆腔壁内表面的腹膜称为壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄层；覆盖腹、盆腔器表面的部分称为脏腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜脏层
。脏腹膜与壁腹膜互相延续、移行
，共同围成不规则的潜在性腔隙，称为腹膜腔（peritoneal-cavity）。腹膜腔是脏、壁两层腹膜之间相互移行围成的潜在性间隙
。腹膜腔内有少量浆液，在脏器活动时可减少摩擦。腹膜间皮细胞属于上皮组织中的单层扁平上皮
，是覆盖于腹膜表面的一层细胞
。间皮细胞是构成间皮的细胞，正常大小约为15-25微米，细胞常呈圆形或者卵圆形
。其功用是提供润滑，使器官与器官

、器官与胸膜与腹膜间都能得到良好的保护，不会互相磨损受伤。而间皮所生产的润滑和保护作用就是靠间皮细胞所分泌的物质来达成，分泌物多半为细胞外基质
、玻尿酸类物质

。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠腹膜间皮采用混合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶

。

质量检测

公司实验室分离的大鼠腹膜间皮经PCK、Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等

。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA 试剂盒

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)检测试剂盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗胶原蛋白抗体(CLA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG检测试剂盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)检测试剂盒规格

：96T/48T

IGFBP4重组食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

PDE9A重组人 PDE9A 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CBFB Protein Human 重组人 CBFB / CBF-beta 蛋白

KLK7 Protein Mouse 重组小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

CBFB Protein Human 重组人 CBFB / CBF-beta 蛋白

IGFBP4重组食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

KLK7 Protein Mouse 重组小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

PDE9A重组人 PDE9A 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human deoxyribonucleic protein aibody (DNP-Ab) ELISA Kit 人抗脱氧核糖核蛋白抗体(DNP-Ab)检测试剂盒

Humangasieceptor,GsaRELISAKit 人促胃液素受体(GsaR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforACA-IgMELISAKit大鼠抗心0脂抗体IgM

药品乙酸比色法定量检测试剂盒20次

Mouseoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠腹膜间皮细胞鸭γ干扰素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠活化素A受体抗体(ACV-RAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠脑红蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T